间充质干细胞移植后抑制肝星状细胞活化减轻肝纤维化

发布时间：2021-10-16 23:34

　　目的 :研究间充质干细胞（mesenchymal stem cell,MSC）移植后对肝纤维化及肝星状细胞（hepatic stellate cells,HSC）活化的抑制作用。方法:Ficoll-Hypaque梯度密度离心法及细胞贴壁培养法分离纯化4周龄SD大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cell,BM-MSC）。取18只SD大鼠,通过腹腔小剂量注射四氯化碳（CCl4）8周,进行肝纤维化造模,在造模4周时,取其中9只作为治疗组,每周经尾静脉移植给予该组每只大鼠6×106个MSC;另外9只作为模型对照组,经尾静脉给予不含MSCs的等量生理盐水;另取9只大鼠,作为正常对照组,仅给予尾静脉等量生理盐水注射,持续4周。自实验开始,每周用全自动生化分析仪测定血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（TBIL）、白蛋白（ALB）水平,至结束共测定8次。实验终点时通过免疫组化对α平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、转化生长因子β1（transforming growth facto... 

【文章来源】：南京医科大学学报(自然科学版). 2015,35(07)北大核心CSCD

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【部分图文】：

SD大鼠血清肝功能相关指标测定－500－1000－5第1周第2周第3周第4周第5周第6周第7周第8周第1周第2周第3周第4周第5周第6周第7周第8周第

南京医科大学学报第35卷第7期2015年7月左下角图为炎性浸润区域放大图（×400）。图2SD大鼠肝脏切片HE染色Figure2LiverslicesHEstaininginSDrats模型组治疗组正常对照组2．3．2Masson染色Masson染色统计学分析用Image-Proplus软件进行，结果显示治疗组总胶原含量明显低于模型组，说明治疗组纤维化程度较模型组轻（图3）。2．3．2α-SMA、COLⅠ、TGF-β1免疫组织化学染色模型组大鼠肝脏切片镜下显示肝细胞排列紊乱，假小叶形成明显，假小叶间纤维增生组织高表达COLⅠ，纤维组织内侧高表达TGF-β1，窦周高表达α-SMA。治疗组肝索结构趋于正常，纤维组织增生不明显，纤维增生组织COLⅠ表达较模型组明显减低，纤维组织内侧TGF-β1表达极少，较模型组明显减低，窦周表达α-SMA较模型组明显减少。正常对照组肝索结构正常，呈放射状排列，小叶结构正常，小叶间无明显纤维隔形成，无明显COLⅠ表达，纤维组织内侧基本无TGF-β1表达，窦周基本不表达α-SMA（图3）。2．4SD大鼠HSC提取及鉴定分离得到的HSC接种后立即置于326nm紫外光下受激发，细胞自发出极易淬灭的荧光；培养约7d后HSC活化，α-SMA免疫荧光染色呈阳性，经上述两种方法可鉴定提取的细胞为HSC（图4）。2．5HSC中α-SMA、TGF-β1mRNA和蛋白表达qRT-PCR检测数据显示：治疗组α-SMA、TGF-β1、COLⅠmRNA的表达量明显低于模型组（P＜0．01）；Westernblot结果显示：治疗组HSC细胞中α-SMA、TGF-β1的蛋白表达量明显低于模型组（P＜0．01，图5）。提示治疗组经尾静脉MSC移植后，HSC中α-SMA、TGF-β1mRNA和蛋白的表达较模型组明显减低，HSC活化程度受抑制。3讨论MSC作为基质干细胞的一种拥有自我复制和多分化的潜能，具有免疫调节、抗炎症反应和外分泌营养功能

**P＜0．01；与治疗组比较，＃P＜0．05，＃＃P＜0．01（n＝4）；B：HSC中α-SMA、TGF-β1的蛋白表达量，GAPDH作为内参（8周）；C：用ImageJ软件对Westernblot结果作灰度量化分析，每指标重复3次取均值。与模型组比较，**P＜0．01；与治疗组比较，＃＃P＜0．01（n＝3）。图5SD大鼠HSC中α-SMA、TGF-β1mRNA和蛋白表达水平的变化Figure5α-SMA，TGF-β1mRNAandproteinexpressionchangesofHSCinSDratsABCA：HSC培养7d（×100）；B：HSC接种后326nm紫外光激发（×100）；C：HSC活化后高表达α-SMA（×400）。图4SD大鼠HSC培养及鉴定Figure4IdentificationandmorphologyofHSCculturedinvitroABC—α-SMA—GAPDH—TGF-β1—GAPDH正常对照组治疗组模型组6543210mRNA相对倍数α-SMATGF-β1****＃＃****＃蛋白相对倍数3．02．52．01．51．00．50α-SMATGF-β1**＃＃**＃＃****高表达α-SMA与其自身获得收缩能力有关［17］。TGF-β1被认为是加速肝纤维化形成的主要细胞因子，在正常肝脏中表达较低，HSC在肝纤维化过程中被激活后开始大量表达TGF-β1并通过TGF-β／Smad信号通路反作用于自身，促其胶原基因表达、加速胶原的分泌和沉积［18］。在本实验组织病理研究中发现治疗组肝组织纤维化程度及α-SMA、TGF-β1、COLⅠ表达水平均明显降低，与Tanimoto等［19］用人MSC培养后治疗免疫缺陷小鼠肝纤维化研究结果类似。因此，推测此结果可能与MSC移植后HSC活化程度减低有关。接下来我们直接提取HSC进行RNA和蛋白表达分析，实验结果提示治疗组HSC中α-SMA、TGF-β1mRNA和蛋白的表达水平皆低于模型组，表明

【参考文献】：
期刊论文
[1]间充质干细胞旁分泌物质诱导肝星状细胞凋亡的体外研究[J]. 徐喨,施启鹏,周晗,蔡洁,李军,章莉莉.  南京医科大学学报(自然科学版). 2014(08)



本文编号：3440700