ATP-CD39-CD73通路调控肝星状细胞炎症因子和纤维化因子分泌在酒精性肝病中的作用

发布时间：2021-12-17 12:57

　　酒精性肝病（Alcoholic liver disease,ALD）是由于长期大量饮酒导致的肝脏疾病。初期通常表现为脂肪肝,进而可发展成酒精性肝炎、肝纤维化和肝硬化。其分子机制和病理机制不明,临床上没有确切的药物用于ALD。研究发现嘌呤能信号（Purinergic signalling）参与肝脏疾病的病理生理调节过程。乙醇等外界刺激下,细胞将胞内三磷酸腺苷（Adenosine Triphosphate,ATP）释放至胞外,提示机体启动免疫防御。当细胞应激或受损时ATP释放至细胞外,立即被胞外酶CD39（ecto-nucleoside triphosphate diphosphohydrolase,NTPDase1）水解为一磷酸腺苷（Adenosine Monophosphate,AMP）,而胞外CD73（Ecto-5’-Nucleotidase,NT5E）将AMP水解为腺苷（Adenosine）。腺苷脱氨酶（Adenosine Deaminase,ADA）可水解灭活腺苷。因此,胞外酶CD39-CD73共同调控腺苷浓度。肝星状细胞（Hepatic stellate cells,HSCs）... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

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【学位级别】：博士

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ATP-CD39-CD73信号调节HSCs炎症因子分泌及活化增殖的假设作用机制示意图

安徽医科大学博士论文20blotting或免疫组化。（8）二抗溶液：用含有5%伊利脱脂牛奶的TBST溶解，用于封闭，浓度为1:10000或按照使用说明书配制成所需浓度。2.2实验方法2.2.1急性酒精性肝损伤小鼠模型制备（1）模型组灌胃酒精溶液：灌胃前临时配制，按照以下比例：95%乙醇的体积（ml）=要配乙醇液体积（ml）×0.33。水的量（ml）=拟配制酒精溶液的体积（ml）×0.67。将95%酒精的量与水混合，混匀。如此配制的酒精溶液为31.5%(v/v)。对照组灌胃糊精溶液：灌胃前临时配制，按照以下比例：糊精的质量（g）=拟配制糊精溶液的体积（ml）×0.45将以上糊精加水溶解，定容至拟配制糊精溶液的体积（ml）。如此配制的酒精溶液为45%(w/v)。灌胃：每只动物按体重计算，灌胃溶液的体积（μl）=体重（g）×20。注意：灌胃时，抽取酒精液体饲料（模型组）或糊精溶液之前需要重新摇匀。（2）先适应性喂养液体饲料5d，然后给予含5%酒精的液体饲料喂养10d，于第11d小鼠经单次灌胃给予5g/kg的酒精，在灌胃后9h分别称取体重后剖杀采集血液，留取肝脏组织待测。所有小鼠在取血剖杀前均禁食14h。模型制备的流程图如下：图2急性酒精性肝损伤小鼠模型制备Fig2Flowchartofmousemodelofacutealcoholicliverinjury

安徽医科大学博士论文242.2.9慢性酒精性肝纤维化小鼠模型制备（1）灌胃用酒精溶液。用于模型组灌胃。灌胃前临时配制，按照以下比例：95%乙醇的体积（ml）=要配乙醇液体积（ml）×0.33。水的量（ml）=拟配制酒精溶液的体积（ml）×0.67。将95%酒精的量与水混合，混匀。如此配制的酒精溶液为31.5%(v/v)。（2）灌胃用糊精溶液。用于对照组灌胃。灌胃前临时配制，按照以下比例：糊精的质量（g）=拟配制糊精溶液的体积（ml）×0.45将以上糊精加水溶解，定容至拟配制糊精溶液的体积（ml）。如此配制的酒精溶液为45%(w/v)。灌胃：每只动物按体重计算，灌胃溶液的体积（μl）=体重（g）×20。注意：灌胃时，抽取酒精液体饲料（模型组）或糊精溶液之前需要重新摇匀。（3）参考文献中的造模方法[44]。简言之，C57BL/6小鼠液体饲料适应5天后，用含5%酒精的液体饲料喂养8w，喂养期间每周给予5g/kg的酒精溶液灌胃2次/w，最后一次酒精灌胃9h后采血，留取肝脏组织待测。模型流程图如下。图3慢性酒精性肝纤维化小鼠模型制备Fig3Flowchartofmousemodelofalcoholicliverfibrosis（4）样本处理

【参考文献】：
期刊论文
[1]Morin enhances hepatic Nrf2 expression in a liver fibrosis rat model[J]. Liang Sang,Xue-Mei Wang,Dong-Yang Xu,Li-Xuan Sang,Yang Han,Long-Yang Jiang.  World Journal of Gastroenterology. 2017(47)
[2]Naringenin prevents experimental liver fibrosis by blocking TGFβ-Smad3 and JNK-Smad3 pathways[J]. Erika Hernández-Aquino,Natanael Zarco,Sael Casas-Grajales,Erika Ramos-Tovar,Rosa E Flores-Beltrán,Jonathan Arauz,Mineko Shibayama,Liliana Favari,Víctor Tsutsumi,José Segovia,Pablo Muriel.  World Journal of Gastroenterology. 2017(24)
[3]萱草花总黄酮改善CCl4致大鼠肝纤维化的作用[J]. 沈楠,黄晓东,李治伟,王艳春,齐玲,安英,刘婷婷.  药学学报. 2015(05)
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本文编号：3540168