TGF-β1参与慢性胰腺炎大鼠腹部痛觉过敏的机制研究

发布时间：2017-05-26 17:03

  本文关键词：TGF-β1参与慢性胰腺炎大鼠腹部痛觉过敏的机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的TGFβ1即转化生长因子beta1是一种小分子蛋白因子,有报道显示TGFβ1在炎症局部组织中分泌量显著增加,并在局部组织的伤口愈合以及促使纤维化过程中扮演着重要角色。然而,TGFβ1在外周伤害性感觉传递过程中所起的作用尚不太清楚。本研究旨在探讨TGFβ1对外周初级感觉神经元兴奋性的急性作用及其在慢性胰腺炎大鼠的痛觉过敏中扮演的角色。方法1.在180-200 g雄性SD大鼠胰管内注射三硝基苯磺酸(TNBS)诱导慢性胰腺炎(CP)模型。2.胰腺壁注射荧光素(Dil)逆行标记胰腺特异性背根神经节(DRG)神经元。运用全细胞膜片钳方法研究TGFβ1对胰腺相关DRG神经元膜电位和兴奋性的作用。3.运用钙成像方法研究TGFβ1对胰腺相关DRG神经元胞内钙离子浓度的影响。4.运用Western Blotting检测TGFβ1及其受体在大鼠胰腺和胰腺相关节段DRG(T9-T13)中的表达水平。5.运用Von frey filament(VFF)评测正常大鼠或CP大鼠在注射药物前后痛行为反应。结果1.全细胞膜片钳记录显示,灌流TGFβ1引起胰腺特异性DRG神经元细胞膜去极化并进一步诱发动作电位,升高神经元兴奋性;与对照组比较,灌流TGFβ1使CP大鼠胰腺相关DRG神经元去极化及放电更加显著。2.钙成像结果显示,灌流TGFβ1可使正常大鼠胰腺相关DRG神经元胞内钙离子浓度上升;与对照组比较,灌流TGFβ1使CP大鼠胰腺相关DRG神经元胞内钙离子浓度上升更加显著。3.与对照组比较,CP大鼠胰腺中TGFβ1及其前体表达水平显著升高,胰腺相关DRG中的TGFβ1及其前体,TGFβI型和II型受体表达水平显著升高。4.鞘内注射TGFβ1诱发正常大鼠产生腹部痛觉过敏;鞘内注射TGFβ受体拮抗剂SB431542明显缓解CP大鼠的痛觉过敏。结论我们的研究提示TGFβ1对初级感觉神经元有急性的兴奋作用,在慢性胰腺炎大鼠外周神经系统中激活的TGFβ1/TGFβ受体信号通路参与介导慢性胰腺炎的痛觉过敏。这些结果以及后续的研究将有助于发现慢性胰腺炎疼痛治疗的新靶标。
【关键词】：慢性胰腺炎 TGFβ1 背根神经节 腹部痛觉过敏
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R576
【目录】：

• 摘要4-6
• 英文摘要6-10
• 第一章 引言10-12
• 第二章 材料与方法12-23
• 2.1 实验对象12
• 2.2 慢性胰腺炎（CHRONIC PANCREATITIS，CP）大鼠模型的建立12
• 2.2.1 实验用药12
• 2.2.2 造模方法12
• 2.3 大鼠腹部机械痛阈检测12-13
• 2.3.1 实验仪器12
• 2.3.2 实验用药12-13
• 2.3.3 测试方法13
• 2.4 胰腺相关DRG神经元的标记、急性分离与培养13-15
• 2.4.1 实验仪器13
• 2.4.2 实验试剂13-14
• 2.4.3 荧光染料Dil标记胰腺相关DRG神经元14
• 2.4.4 DRG神经元的急性分离与培养14-15
• 2.5 全细胞膜片钳实验15-19
• 2.5.1 实验仪器15
• 2.5.2 实验试剂及药品15
• 2.5.3 拉制玻璃微电极15
• 2.5.4 全细胞膜片钳记录15-18
• 2.5.5 神经元兴奋性记录18-19
• 2.6 钙成像记录19-20
• 2.6.1 实验仪器19
• 2.6.2 实验试剂及药品19
• 2.6.3 荧光染料染色19
• 2.6.4 钙成像记录19-20
• 2.7 Western Blotting检测蛋白表达水平20-23
• 2.7.1 实验试剂20-21
• 2.7.2 实验仪器21
• 2.7.3 实验方法21-23
• 第三章 实验结果23-37
• 3.1 TGFΒ1 对胰腺相关DRG神经元兴奋性的急性作用23-29
• 3.1.1 TGFβ1 使DRG神经元细胞膜去极化和诱发动作电位23
• 3.1.2 TGFβ1 灌流DRG神经元显著提高其兴奋性23-25
• 3.1.3 TGFβ1 使DRG神经元细胞内钙离子浓度上升25-27
• 3.1.4 TGFβⅠ型受体介导TGFβ1 诱发的DRG神经元胞内钙离子浓度上升27-28
• 3.1.5 外源性TGFβ1 导致正常大鼠产生腹部痛觉过敏28-29
• 3.2 TGFΒ1 参与慢性胰腺炎（CP）大鼠的腹部痛觉过敏29-37
• 3.2.1 与对照组相比，CP大鼠胰腺中TGFβ1 表达升高，胰腺相关节段的DRG中TGFβ1 及其Ⅰ和Ⅱ型受体的表达升高29-32
• 3.2.2 与对照组相比，，外源TGFβ1 使CP大鼠胰腺相关DRG神经元去极化及放电更加显著32-33
• 3.2.3 与对照组相比，外源 TGFβ1 使 CP 大鼠胰腺相关 DRG 神经元细胞内钙离子浓度上升更加显著33-34
• 3.2.4 TGFβⅠ型受体拮抗剂SB431542显著翻转了CP大鼠的痛觉过敏34-37
• 第四章 讨论37-41
• 结论41-42
• 参考文献42-45
• 综述45-55
• 参考文献51-55
• 攻读硕士学位期间公开发表的论文与会议摘要55-56
• 致谢56-58

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