SIRT3/FOXO1通路对非酒精性脂肪性肝病模型细胞氧化应激的调控

发布时间：2024-12-20 23:41

　　目的通过油酸(Oleic acid,OA)干预HepG2细胞建立非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)模型细胞,探讨SIRT3调控NAFLD模型细胞氧化应激的机制及丹酚酸B(Salvianolic acid,Sal B)干预作用。方法将HepG2细胞分为对照组、模型组(OA)及干预组(OA+Sal B)。对照组细胞用完全培养基培养24 h;模型组细胞用含1 mmol/L OA的培养基干预24 h;干预组细胞用含1 mmol/L OA的培养基干预24 h,然后用含Sal B的培养基处理3 h。干预完成后,用油红O染色观察细胞内脂滴聚集情况,检测上清液的相关生化指标,证实建模成功。采用荧光探针试剂盒检测细胞内ROS水平,丙二醛(Malondialdehyde,MDA)试剂盒测定MDA含量;RT-qPCR和Western Blot检测SIRT3、SOD2的mRNA及蛋白相对表达量;免疫沉淀法(IP)检测Forkhead转录因子O1(Forkhead box O1,FOXO1)的乙酰化水平;运用SIRT3过表达质粒上调SIRT3及SIR...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
引言
1 实验材料
    1.1 主要试剂
    1.2 实验仪器
    1.3 实验细胞
2 实验方法
    2.1 细胞培养
    2.2 HepG2细胞标准生长曲线测定
    2.3 MTT筛选药物浓度
    2.4 细胞分组
    2.5 NAFLD模型验证
        2.5.1 油红O染色
        2.5.2 生化指标检测
    2.6 MDA的检测
    2.7 ROS的检测
    2.8 RT-qPCR检测SIRT3和SOD2 mRNA的表达
    2.9 WesternBlot检测SIRT3及SOD2蛋白表达
    2.10 IP检测FOXO1的乙酰化水平
    2.11 转染siRNA
    2.12 转染质粒DNA
    2.13 统计学分析
3 结果
    3.1 HepG2细胞标准生长曲线的测定
    3.2 MTT筛选药物浓度
    3.3 油红O染色
    3.4 生化指标检测
    3.5 MDA的测定
    3.6 ROS的测定
    3.7 SIRT3、SOD2的mRNA和蛋白及乙酰化FOXO1的蛋白表达
    3.8 HepG2细胞转染SIRT3-siRNA及SIRT3高表达质粒的效率筛选
    3.9 转染后各组细胞SIRT3及乙酰化FOXO1蛋白表达情况
4 讨论
结论
参考文献
综述
    参考文献
攻读硕士学位期间发表学术论文情况
致谢



本文编号：4018046