EZH2在肝纤维化中的作用及其部分机制研究

发布时间：2025-01-01 07:52

　　肝纤维化是所有慢性肝脏疾病形成的共同病理反应过程,活化的肝星状细胞分泌的细胞外基质(ECM)的增多是肝脏纤维化发病的最主要特征之一,肝星状细胞(HSC)的增殖和活化是肝脏纤维化形成的关键环节,抑制HSC的增殖和活化成为抗肝纤维化治疗的重要手段之一。研究表明组蛋白甲基化在HSC的增殖活化过程中起到了很重要的作用,但具体机制尚不明确。为了更进一步地探讨组蛋白甲基化在肝纤维化形成过程中的重要作用及其机制,通过在体与离体两个不同的角度,首先观察在肝纤维化组织中和活化的肝星状细胞中与组蛋白甲基化有关的转移酶的表达变化情况,再观察组蛋白甲基化有关的转移酶对HSC增殖和活化的影响,最后更深一步地探讨了其部分作用机制。本文主要研究内容包括下面四个部分:1.CCl4诱导的大鼠肝脏组织中EZH2和Dkk1的表达变化。将40只大鼠分为正常组10只和模型组30只,取CCl4进行腹腔注射用以建立大鼠肝纤维化的模型。模型组的大鼠以50%CCl4植物油溶液(1ml/kg)进行腹腔注射,每周注射2次,共注射12周;正常组以相同剂量植物油进行腹腔注射,同样每周注射2次,共注射12周。在12周结束后,处死实验大鼠并获取肝脏...

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

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英文摘要
1 前言
2 实验材料
    2.1 实验动物
    2.2 药品与试剂
        2.2.1 抗体
        2.2.2 主要药品与试剂
    2.3 仪器与设备
    2.4 图象分析软件
3 实验方法
    3.1 实验动物的处理与模型的建立
    3.2 大鼠肝星状细胞的培养
    3.3 肝组织病理学检测
        3.3.1 大鼠肝组织病理HE染色
        3.3.2 大鼠肝组织病理Masson染色
    3.4 免疫组织化学检测
    3.5 MTT增殖实验
    3.6 肝脏组织与肝星状细胞总RNA的提取和逆转录
        3.6.1RNA提取
        3.6.2 逆转录
    3.7 PCR扩增实验
        3.7.1 引物序列
        3.7.2 Real-time PCR
    3.8 Western Blot实验
        3.8.1 用液的配制
        3.8.2 蛋白样品制备
        3.8.3 SDS-PAGE电泳
        3.8.4 转膜
        3.8.5 抗原抗体反应
        3.8.6 显影
        3.8.7 显影结果的分析
    3.9 siRNA实验
        3.9.1 EZH2的siRNA实验
        3.9.2 Dkk1的siRNA实验
    3.10 统计学处理
4 实验结果
    4.1 CCl₄诱导的大鼠肝组织中EZH2和Dkk1的表达变化
        4.1.1 肝脏的组织病理学检测
        4.1.2 CCl₄诱导的大鼠肝纤维化组织中 α-SMA、EZH2和Dkk1mRNA的表达变化
        4.1.3 CCl₄诱导的大鼠肝纤维化组织中 α-SMA、EZH2和Dkk1蛋白的表达变化
    4.2 TGF-β1 诱导的HSC-T6细胞中EZH2和Dkk1的表达变化
        4.2.1 TGF-β1 诱导的HSC-T6细胞中 α-SMA、EZH2和Dkk1mRNA的表达变化
        4.2.2 TGF-β1 诱导的HSC-T6细胞中 α-SMA、EZH2和Dkk1蛋白的表达变化
    4.3 EZH2对TGF-β1 诱导的HSC-T6细胞增殖活化的影响
        4.3.1 EZH2对TGF-β1 诱导的HSC-T6细胞增殖的影响
        4.3.2 EZH2对TGF-β1 诱导的HSC-T6细胞活化的影响
    4.4 EZH2影响HSCs增殖活化的部分机制研究
        4.4.1 EZH2介导Dkk1的表达下降激活了Wnt/β-catenin通路从而影响HSCs的增殖活化
        4.4.2 EZH2通过激活ERK和PI3K/AKT通路从而促进HSCs的增殖活化
5 讨论
6 结论
参考文献
附录
致谢
综述
    参考文献



本文编号：4022273