大蒜素对大鼠肝星状细胞胶原生成的调节作用

发布时间：2017-06-27 16:02

  本文关键词：大蒜素对大鼠肝星状细胞胶原生成的调节作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景：肝病治疗一直是困扰医学界的难题，近几年，肝纤维化的研究对于慢性肝病、肝硬化的形成所拥有的重要研究价值，被医学界所认可，其发生的机制也得有了一定的共识。目前公认的肝纤维化机制，是肝细胞的外基质发生降解减少与过度的沉积所造成的。肝纤维化的研究主要围绕胶原纤维的合成与分解，以及影响胶原合成与分解的因素，以期找到肝纤维化的早期诊断与治疗的办法。其中细胞因子介导细胞与细胞之间、细胞与基质之间的相互作用所引起的肝星状细胞激活肝纤维化过程，，是该研究的最关键部分，如果发生反复的肝损伤，可进一步活化HSC。根据临床与实验资料，脂质过氧化产物能更加容易地激活HSC，从而损伤肝细胞。因此，在治疗的过程中使用抗氧化剂，能够对肝损伤以及肝纤维化症状进行减轻。在抗氧化剂中，大蒜素是非常有效的一种，凭着高度的抗氧化能力，在临床与实验中得到广泛的应用。 目的：观察大蒜素对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖、凋亡的影响，探讨大蒜素抗肝纤维化的作用及其机制。 方法：大鼠肝星状细胞株HSC-T6生长于体积分数为10%小牛血清及1×10~5IU/L的青霉素、100mg/L的链霉素的DMEM培养液中，在37℃、5%CO_2饱和蒸汽的条件下进行培养。分为HSC-T6细胞空白对照组、溶剂对照组、大蒜素药物实验组。大蒜素药物实验组加入不同浓度的DATS。以不加药物而加等体积的10%小牛血清及1×10~5IU/L的青霉素、100mg/L的链霉素的DMEM培养基为试剂对照组。溶剂对照组加入1.35μl/ml二甲基亚砜。通过MTT法检测大蒜素对大鼠肝星状细胞的增殖的影响；通过BrdU掺入实验检测大蒜素对大鼠肝星状细胞的增殖抑制作用；通过Hoechst33342染色及流式细胞术检测Annexin V-FITC/PI双染检测大蒜素对大鼠肝星状细胞的凋亡作用；透射电镜下观察大蒜素作用后大鼠肝星状细胞的超微结构的变化；Western blot实验鉴定大蒜素作用后大鼠肝星状细胞的Bcl-2、MAO、TIMP-1蛋白的影响。 结果：HSC-T6大蒜素DATS各浓度处理组与空白对照组及溶剂对照组比较，增殖抑制率和细胞凋亡率明显增高，有显著性差异(P0.05)；并且DATS浓度增高时，HSC-T6的抑制率、凋亡率也逐渐增强；DATS高浓度实验组（浓度含量24μg/ml DATS）的增殖抑制率和细胞凋亡率明显高于空白对照组、试剂对照组及低浓度实验组。大蒜素可抑制大鼠肝星状细胞的Bcl-2、MAO、TIMP-1蛋白的生成。 结论：大蒜素可以抑制HSC-T6增殖，抑制其凋亡相关蛋白及胶原生成相关蛋白，并诱导其凋亡，且具有时间浓度依赖性。
【关键词】：大鼠肝星状细胞 大蒜素 凋亡 细胞增殖 肝纤维化
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R575.2
【目录】：

• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 前言12-16
• 第一部分 大蒜素对大鼠肝星状细胞增殖的影响16-29
• 前言16-17
• 1 材料和方法17-22
• 1.1 材料17-18
• 1.2 实验方法18-22
• 2 结果22-25
• 2.1 HSC-T6 细胞在不同浓度大蒜素作用不同时间发生的形态学改变22-23
• 2.2 MTT 法测不同浓度的大蒜素作用不同时间对 HSC-T6 细胞增殖的影响23-24
• 2.3 BrdU 试验检测不同浓度大蒜素作用不同时间对大鼠肝星状细胞的增殖抑制作用24-25
• 3 讨论25-29
• 第二部分 大蒜素对大鼠肝星状细胞凋亡的影响29-43
• 前言29-30
• 1 材料和方法30-36
• 1.1 材料30-31
• 1.2 实验方法31-35
• 1.3 统计学方法35-36
• 2 实验结果36-39
• 2.1 Hoechst 33342 染色法检测不同浓度大蒜素作用不同时间诱导大鼠肝星状细胞的凋亡的作用36-38
• 2.2 透射电镜观察大蒜素对 HSC-T6 超微结构的影响38
• 2.3 流式细胞仪检测 Annexin V-FITC/PI 双染色测大蒜素对 HSC-T6 细胞凋亡的影响38-39
• 3 讨论39-43
• 第三部分 大蒜素对大鼠肝星状细胞胶原相关蛋白的影响43-51
• 前言43-44
• 1 材料和方法44-48
• 1.1 材料44-45
• 1.2 实验方法45-48
• 1.3 统计学方法48
• 2 实验结果48-49
• 3 讨论49-51
• 结论51-52
• 参考文献52-54
• 文献综述54-61
• 参考文献59-61
• 致谢61-62
• 作者简介62-63
• 导师评阅表63

【参考文献】

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本文编号：490351