齐墩果酸抑制HMGB1-TLR4-中性粒细胞正反馈环减轻小鼠肝缺血再灌注损伤

发布时间：2017-07-16 23:15

  本文关键词：齐墩果酸抑制HMGB1-TLR4-中性粒细胞正反馈环减轻小鼠肝缺血再灌注损伤

  更多相关文章： 齐墩果酸 肝缺血再灌注损伤 HMGB1 TLR4 中性粒细胞

【摘要】：目的:探讨齐墩果酸(oleanolic acid,OA)对小鼠肝缺血(ischemiareperfusion,IR)再灌注损伤的保护作用及其机制。方法:将Balb/c雄性小鼠随机分为4组:假手术对照组(Control组)、齐墩果酸对照组(OA组)、肝缺血再灌注模型组(IR组)和齐墩果酸干预组(OA+IR组)。肝缺血再灌注模型组(IR组)干预方式:小鼠麻醉好后,沿着腹白线剖开,暴露门脉三联管(小叶间动脉、小叶间静脉和小叶间胆管)用无创小号血管夹将其夹闭,使70%的肝脏缺血3 h再灌注6 h。齐墩果酸的给药剂量为100 mg/kg,给药方式为灌胃3次,每次间隔8 h(最后一次灌胃在术前半小时)。小鼠肝脏再灌注6 h后获得血清,检测其丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)和天冬氨酸转氨酶(aspartate transaminase,AST)活性水平;取缺血再灌注肝叶(中叶或者左叶)做石蜡切片后再用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色,观察肝脏组织病理变化;原位末端转移酶标记技术TUNEL(transferase-mediated deoxyuridine triphosphate nick end labeling)和蛋白印记法(Western blot)检测有关调控凋亡的信号分子bax、bcl-2、cleavedcaspase-3、cleavedcaspase-7和cleavedcaspase-9评价肝脏组织的坏死程度和细胞凋亡情况。免疫组织化学(immunohistochemistry,ihc)定性检测高迁移率族蛋白b1(highmobilitygroupbox-1protein,hmgb1)的表达情况;实时定量逆转录pcr(quantitativereversetranscriptionpcr,qrt-pcr)检测toll样受体4(tolllikereceptor4,tlr4)、肿瘤坏死因子-?(tumornecrosisfactor-alpha,tnf-?)和白细胞介素-1?(interleukin-1beta,il-1?)mrna的表达;酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunosorbentassay,elisa)检测血清中tnf-?和il-1?的表达;westernblot分析肝脏组织中磷酸化的丝裂原活化蛋白酶(mitogen-activatedproteinkinases,mapks):磷酸化的细胞外调节蛋白激酶(phosphorylatedextracellularsignal-regulatedkinase,p-erk)、磷酸化的p-c-jun氨基末端激酶(phosphorylatedc-junn-terminalkinase,p-jnk)和磷酸化的p-38(p-p38)蛋白水平的变化;流式细胞术(flowcytometry,fcm)分析中性粒细胞募集程度。结果:oa+ir组与ir组相比,oa预处理后,血清中alt和ast的活性水平显著降低,肝脏组织病理损伤程度减小以及凋亡细胞明显减少,由核内释放到细胞外的hmgb1极大地减少,tlr4和磷酸化的mapks蛋白表达水平均明显下调,tnf-?和il-1?的mrna和蛋白表达水平显著降低,中性粒细胞的募集极大地减少。结论:齐墩果酸对小鼠肝缺血再灌注诱导的损伤具有保护作用。其保护作用机制可能与抑制HMGB1-TLR4-中性粒细胞正反馈环从而阻断了炎症级联反应有关。
【关键词】：齐墩果酸 肝缺血再灌注损伤 HMGB1 TLR4 中性粒细胞
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-13
• 1 材料和方法13-30
• 1.1 材料13-23
• 1.2 方法23-30
• 2 结果30-38
• 2.1 OA对小鼠肝缺血再灌注损伤血清转氨酶（ALT/AST）活性水平和肝脏组织损伤情况的影响30-32
• 2.2 OA对肝缺血再灌注损伤中细胞的凋亡的影响32-33
• 2.3 OA对小鼠肝缺血再灌注诱导的肝损伤中HMGB1、TLR4、p-ERK、p-JNK、p-P38蛋白表达水平的影响33-35
• 2.4 OA对炎症因子TNF-a和IL-1b的转录和释放的影响35-36
• 2.5 OA对小鼠肝缺血再灌注诱导的肝损伤中中性粒细胞募集的影响36-38
• 3 讨论38-40
• 4 结论40-41
• 参考文献41-46
• 文献综述46-53
• 参考文献50-53
• 致谢53-54
• 硕士期间发表的论文54

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本文编号：550988