小鼠肝脏原代Kupffer细胞的分离和纯化

发布时间：2017-08-06 10:25

  本文关键词：小鼠肝脏原代Kupffer细胞的分离和纯化

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【摘要】：目的利用低速离心和差速贴壁的特性,探索一种高效分离纯化BALB/c小鼠Kupffer细胞(KC)的方法。方法采用0.5 g/L 4型胶原蛋白酶原位灌注和消化肝脏组织,低速分离肝脏的细胞后差速贴壁分离纯化KC,与Percoll密度梯度离心分离方法比较KC的产量和活性,应用F4/80免疫荧光染色鉴定细胞形态、流式细胞术检测F4/80的表达、墨汁吞噬实验进行吞噬功能鉴定。构建KC缺氧/复氧模型,流式细胞术检测主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ、CD40、CD68和CD86的表达,ELISA检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达。结果每只小鼠肝脏可获得(5.83±0.54)×106个KC,细胞存活率达92%,Percoll密度梯度分离仅能获得(2.19±0.43)×106个KC,F4/80免疫荧光染色显示贴壁后KC呈梭形或棘状,流式细胞术鉴定F4/80阳性细胞占比接近90%,吞墨实验可见胞质内大量被吞噬的碳颗粒。KC在缺氧复氧模型下MHC-Ⅱ、CD40、CD86分子表达增多,并分泌TNF-α参与炎症反应。结论成功建立了BALB/c小鼠KC分离纯化的方法。
【作者单位】： 重庆医科大学附属第一医院肝胆外科;
【关键词】： 库普弗细胞(Kupffer细胞) 分离方法 改良 小鼠
【基金】：重庆市科技计划项目(cstc2015shmszx120019)
【分类号】：R575
【正文快照】： 库普弗细胞(Kupffer cells,KC)是肝脏含量丰富的免疫细胞,其数量约占肝非实质细胞数量的30%[1]。KC参与多种因素所致的肝损伤及继发病变,在炎症反应、缺血再灌注损伤、移植和肿瘤免疫等发挥至关重要的作用[2-5]。体外原代培养是目前研究KC参与调控相关疾病作用机制的有效手段

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本文编号：629477