KLF4基因沉默大鼠肝星状细胞中Smad 2、3、7 mRNA及蛋白表达观察

发布时间：2017-08-13 23:03

  本文关键词：KLF4基因沉默大鼠肝星状细胞中Smad 2、3、7 mRNA及蛋白表达观察

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【摘要】：目的观察Kruppel样因子4(KLF4)基因沉默对大鼠肝星状细胞HSC-T6中Smad 2、3、7 mRNA及蛋白表达的影响。方法设计并构建针对大鼠KLF4基因的3个干扰质粒(p GPU6-1、p GPU6-2、p GPU6-3),将质粒转染HSC-T6细胞,检测KLF4 mRNA及蛋白,筛选出沉默效果最好的重组质粒用于后续实验。将HSC-T6细胞分为A、B、C、D组,A组常规培养细胞;B组在培养液中加入TGF-β_1 50 ng/m L;C组转染重组质粒p GPU6-3;D组转染干扰质粒p GPU6-3 24 h后,再加入TGF-β_1 50 ng/m L。采用real-time PCR法检测各组细胞中的Smad2、Smad3、Smad7mRNA。采用Western blotting法检测各组细胞中的Smad2、Smad3、Smad7蛋白和磷酸化Smad2、3(p-Smad2、3)蛋白。结果 B、D组细胞中Smad2、Smad3、Smad7 mRNA相对表达量高于A组,C组细胞中Smad7 mRNA相对表达量高于A组(P均0.05)。C组、D组细胞中p-Smad2、p-Smad3蛋白相对表达量低于A组,Smad7蛋白相对表达量高于A组(P均0.05)。B组细胞中Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3、Smad7蛋白相对表达量均高于A组(P均0.05)。结论 KLF4基因沉默后,HSC-T6细胞(包括被TGF-β_1激活的HSC-T6)中p-Smad2、p-Smad3蛋白表达下调,Smad7 mRNA及蛋白表达上调;抑制KLF4基因表达可能有抗纤维化作用,作用机制与抑制TGF-β_1/Smad信号通路激活有关。
【作者单位】： 河北医科大学公共卫生学院;石家庄市第三医院;
【关键词】： Kruppel样因子基因 人肝星状细胞 转化生长因子β Smad 基因沉默 肝纤维化
【基金】：河北省卫生和计划生育委员会医学科学研究重点课题计划项目(20150627)
【分类号】：R575.2
【正文快照】： 肝损伤到肝纤维化至肝癌的病变过程中,肝纤维化是关键的中间环节,许多细胞因子和信号通路在其中发挥重要调节作用[1,2]。转化生长因子β1(TGF-β1)已被广泛证明是加速肝纤维化的一个重要因子[3]。TGF-β1主要通过TGF-β1/Smad信号通路激活肝星状细胞(HSCs),增加细胞外基质(ECM

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本文编号：669442