黑豆多糖的提

发布时间：2017-08-19 10:41

  本文关键词：黑豆多糖的提取、结构及其对小鼠急性肝损伤的保护作用研究

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【摘要】：黑豆中不仅含有丰富的营养成分,还具有抗氧化、抗炎、抗肥胖、抗糖尿病和抗突变以及抑制低密度脂蛋白的氧化和减少DNA损伤等多种生物活性。本研究采用水提法提取黑豆多糖,并对其最优提取条件、分离纯化、结构表征、抗氧化活性及其护肝活性等进行系统研究。(1)通过单因素实验结合响应曲面法对黑豆多糖的提取条件进行研究。结果表明,黑豆多糖最佳的提取条件为：液料比为15 m1/g,提取时间为6.4 h,提取温度为92℃,相应的最高提取率为2.56%。(2)通过DEAE-纤维素离子交换色谱柱和Sephadex CL-4B琼脂糖凝胶色谱柱将黑豆多糖分离纯化成三个组分BSPS-1、BSPS-2和BSPS-3,并采用高效体积排阻色谱法测定多糖纯组分的分子量为1.95 × 105Da、3.46 × 105Da和1.88×105Da。(3)通过多种仪器分析法对黑豆多糖的结构进行表征。多糖溶液的紫外扫描结果表明BSPS-1、BSPS-2和BSPS-3在260-280 nm的波长范围内无最大吸收,说明多糖样品中无核酸和蛋白质等杂质。多糖的红外光谱分析结果表明,BSPS-1在1916 cm-1和762 cm-1处的吸收峰说明其具有典型的吡喃葡萄糖残基；而BSPS-2和BSPS-3在1076 cm-1和1043 cm-1处的峰说明其具有吡喃半乳糖和阿拉伯呋喃糖残基。采用三甲基硅醚衍生化法对多糖样品的单糖组成进行分析,结果表明BSPS-1主要由阿拉伯糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖组成,其摩尔比为1.79：1.00：2.59：26.54：1.01；BSPS-2主要由阿拉伯糖、鼠李糖、木糖、甘露糖和半乳糖组成,其摩尔比为8.10：4.80：9.15：13.38：1；BSPS-3主要由阿拉伯糖、鼠李糖、甘露糖和半乳糖组成,其摩尔比为16.80：3.6：33.66：1。甲基化和GC-MS的结果表明,BSPS-1主要是由→6)-Glcp-(1--',构成的；而BSPS-3的主链是由→3)-β-D-Galp-(1→构成,而T-α-LAraf-(1→、→5)-α-L-Araf-(1→、→2)-α-L-Rhap-(1→和4-O-Me-β-D-GlcAp-(1→与→3)-β-D-Galp-1→等其他残基则位于侧链。1D和2D NMR进一步表明,BSPS-1是线性的(1→6)-a-D-葡聚糖,而BSPS-3是Ⅱ型阿拉伯半乳聚糖。(4)对黑豆多糖的体外抗氧化活性和护肝作用进行了研究。体外抗氧化实验表明,粗BSPS和其纯化组分具有较强的超氧阴离子自由基和DPPH自由基清除活性,其体外抗氧化活性大小的顺序为：粗BSPSBSPS-3BSPS-2BSPS-1。体内护肝活性实验表明,相比于四氯化碳模型组,黑豆多糖处理组不仅可以显著抑制血清中大冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶、碱性磷酸酶水平的升高,而且可以显著提高肝组织中超氧化物岐化酶、过氧化物酶、谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽还原酶、谷胱甘肽和总抗氧化能力的水平；此外,还可以显著降低肝组织中的丙二醛水平,而高剂量组黑豆多糖的护肝效果可与水飞蓟素相媲美。研究结果表明,黑豆多糖具有很好的抗氧化活性,同时,对四氯化碳诱导的急性肝损伤有潜在的保护作用。
【关键词】：黑豆 多糖 结构表征 自由基 抗氧化 护肝活性
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575
【目录】：

• 摘要2-4
• Abstract4-10
• 第一章 绪论10-22
• 1.1 黑豆的研究进展10-12
• 1.1.1 黑豆的资源分布10
• 1.1.2 黑豆的营养成分10-11
• 1.1.3 黑豆中的生物活性成分及其功能11
• 1.1.4 黑豆的开发与应用11-12
• 1.2 多糖的研究进展12-15
• 1.2.1 多糖的来源与分布12
• 1.2.2 多糖的提取、分离和纯化12-13
• 1.2.2.1 多糖的提取12-13
• 1.2.2.2 多糖的分离和纯化13
• 1.2.3 多糖的结构分析13-14
• 1.2.4 多糖的生物活性14-15
• 1.2.4.1 免疫调节活性14
• 1.2.4.2 抗氧化活性14-15
• 1.2.4.3 抗肿瘤活性15
• 1.2.4.4 其他生物活性15
• 1.3 本文研究概述15-16
• 1.3.1 本文的研究目的和意义15
• 1.3.2 本文的主要研究内容15-16
• 参考文献16-22
• 第二章 黑豆多糖的提取条件优化22-32
• 2.1 引言22
• 2.2 材料与方法22-24
• 2.2.1 试验材料、试剂与仪器设备22-23
• 2.2.2 黑豆多糖的提取23
• 2.2.3 试验设计23-24
• 2.2.3.1 单因素试验设计23
• 2.2.3.2 Box-Behnken(BB)试验设计23-24
• 2.2.3.3 试验结果的统计分析24
• 2.3 结果与讨论24-30
• 2.3.1 单因素试验结果与分析24-27
• 2.3.1.1 液料比对粗多糖提取率的影响24-25
• 2.3.1.2 提取时间对粗多糖提取率的影响25
• 2.3.1.3 提取温度对粗多糖提取率的影响25-26
• 2.3.1.4 提取次数对粗多糖提取率的影响26-27
• 2.3.2 BBD试验结果与分析27-30
• 2.4 本章小结30
• 参考文献30-32
• 第三章 黑豆多糖的分离纯化32-39
• 3.1 引言32
• 3.2 材料与方法32-34
• 3.2.1 试验材料、试剂与仪器设备32
• 3.2.2 试验方法32-34
• 3.2.2.1 DEAE-纤维素色谱法初步分离32-33
• 3.2.2.2 Sepharose CL-4B琼脂糖凝胶柱层析法进一步纯化33
• 3.2.2.3 多糖组分的纯度鉴定和分子量测定33-34
• 3.3 结果与讨论34-37
• 3.3.1 粗多糖的DEAE-纤维素柱层析34
• 3.3.2 多糖组分F-1和F-2的Sepharose CL-4B琼脂糖凝胶柱层析34-35
• 3.3.3 多糖组分BSPS-1、BSPS-2和BSPS-3的纯度鉴定和分子量测定35-37
• 3.4 本章小结37
• 参考文献37-39
• 第四章 黑豆多糖的结构鉴定39-58
• 4.1 引言39
• 4.2 材料与方法39-41
• 4.2.1 试验材料、试剂与仪器设备39-40
• 4.2.2 紫外光谱分析40
• 4.2.3 红外光谱分析40
• 4.2.4 单糖组分分析40
• 4.2.5 甲基化反应及GC-MS分析40-41
• 4.2.6 核磁共振分析41
• 4.3 结果与讨论41-55
• 4.3.1 BSPS-1、BSPS-2和BSPS-3的紫外吸收光谱图分析41-42
• 4.3.2 BSPS-1、BSPS-2和BSPS-3的红外光谱图分析42-43
• 4.3.3 BSPS-1、BSPS-2和BSPS-3的单糖组分分析43-45
• 4.3.4 BSPS-1和BSPS-3的甲基化与GC-MS分析45
• 4.3.5 BSPS-1和BSPS-3的核磁共振图谱分析45-55
• 4.3.5.1 BSPS-1的核磁共振图谱分析45-50
• 4.3.5.2 BSPS-3的核磁共振分析50-55
• 4.4 本章小结55-56
• 参考文献56-58
• 第五章 黑豆多糖的体外抗氧化活性及其对小鼠急性肝损伤的保护作用58-70
• 5.1 引言58
• 5.2 材料与方法58-61
• 5.2.1 试验材料、试剂与仪器设备58-59
• 5.2.2 黑豆多糖组分的体外抗氧化活性的测定59-60
• 5.2.2.1 超氧阴离子自由基清除活性的测定59
• 5.2.2.2 DPPH自由基清除活性的测定59-60
• 5.2.3 黑豆多糖的护肝活性测定60-61
• 5.2.3.1 动物试验分组与设计60
• 5.2.3.2 生理生化指标测定60
• 5.2.3.3 统计分析60-61
• 5.3 结果与讨论61-66
• 5.3.1 黑豆多糖的体外抗氧化活性61-62
• 5.3.1.1 超氧阴离子自由基清除活性61
• 5.3.1.2 DPPH自由基清除活性61-62
• 5.3.2 黑豆多糖对CCl_4诱导的急性肝损伤的保护作用62-66
• 5.3.2.1 黑豆多糖对小鼠体重和肝脏指数的影响62-63
• 5.3.2.2 黑豆多糖对小鼠血清中ALT、AST和AKP的影响63-64
• 5.3.2.3 黑豆多糖对小鼠肝组织中抗氧化酶活性的影响64-65
• 5.3.2.4 黑豆多糖对小鼠肝组织中MDA、GSH和T-AOC的影响65-66
• 5.4 本章小结66-67
• 参考文献67-70
• 致谢70
• 基金资助70-71
• 攻读学位期间发表的学术论文71-72

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1 温小媛;黑豆多糖的提取、结构及其对小鼠急性肝损伤的保护作用研究[D];扬州大学;2016年

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