miR208b、328、145和155在大鼠H9c2细胞和ACS患者中的表达及意义

发布时间：2017-03-18 02:02

  本文关键词：miR208b、328、145和155在大鼠H9c2细胞和ACS患者中的表达及意义，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景与目的 急性冠脉综合征(acute coronary syndrome, ACS)是一组由急性心肌缺血引起的临床综合征,是常见的心血管疾病之一,包括不稳定心绞痛(unstable angina, UAP)、非ST段抬高心肌梗死(Non-ST-segment elevation myocardial infarction, NSTEMI)和ST段抬高心肌梗死(ST-segment elevation myocardial infarction, STEMI),具有较高的致残率和致死率,严重影响患者的生活质量。ACS的早期诊断,尤其在心肌没有发生坏死的可逆阶段,对提高患者的生存率及生活质量极为重要。目前,肌钙蛋白(CTnT或CTnT)的测定是诊断急性心肌梗死特异性强和灵敏度高的标志物之一,但在患者发生胸痛6h内,CTnT/I可能由于灵敏度不高,在早期诊断方面受到限制,筛选新的心肌标志物用于ACS诊断具有重要意义。近年来,国内外学者研究发现循环微小RNA (microRNA, miRNAs, miRs)可以辅助多种系统疾病的早期诊断。 MiRNAs于1993年在线虫体内首次被发现,是一类长度约为18-25核苷酸的小分子RNA,其结构为非编码单链分子。在动植物体内发现多种miRNAs的存在,其功能主要通过降解靶mRNA或者抑制蛋白质的翻译,参与调节细胞生长、增殖、分化与凋亡；与个体发育、机体代谢、多种疾病的发生发展密切相关。研究表明,miRNA在较长时间内能够以某种机制稳定存在于人类及动物的血液、唾液、尿液等体液中,可能作为生物标志物用于肿瘤、代谢性疾病、组织损伤、炎症疾病等多种疾病临床诊断。报道显示miR208b与心肌纤维、心肌肥厚、心力衰竭及心肌缺血发生有关；miR145与血管平滑肌细胞分化有关；miR-155表达于内皮细胞和血管平滑肌细胞,参与动脉粥样硬化、原发性高血压、心肌肥厚及心肌梗死的病理生理过程,并与血管重塑有关；miR328作为多种病理生理过程的重要调节因子,不仅在心血管疾病中表达,其他疾病,如神经胶质瘤、阿尔茨海默病、原发性胆汁性肝硬化、乳腺癌耐药性等也有异常表达。但是miR208b, miR328, miR145和miR155是否参与ACS发病,在ACS病程中的表达如何变化,仍需进一步研究。 基于上述研究背景,本研究做出以下假设：上述miRNAs在ACS发生心肌缺血时可能以某种形式释放到血液中,使血液中相应miRNAs的水平发生变化,成为心肌细胞损伤的临床辅助诊断指标。针对以上假设本课题进行如下研究：(1)在体外采用大鼠H9c2细胞,用Triton X-100破坏大鼠H9c2心肌细胞,观察细胞培养上清液中miR208b, miR328, miR145, miR155和乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase, LDH)的变化趋势和表达量改变,从体外细胞水平提供miR208b, miR328, miR145和miR155作为一个心肌损伤诊断的可能依据。(2)进一步检测ACS患者血浆miR208b, miR328, miR145和miR155的表达水平,并检测患者血浆中的心肌损伤指标如CK-MB、 CTnT等的表达水平,为揭示上述miRNAs在ACS诊断中的作用提供实验依据。 方法 (1)采用不同浓度(0.I0%,1.00%及2.00%)的Triton X-100处理大鼠H9c2心肌细胞,建立心肌细胞坏死模型。 (2)细胞分组：PBS处理组、0.10%Triton X-100处理组、1.00%Triton X-100处理组及2.00%Triton X-100处理组,每组6孔。 (3)临床分组： ACS患者50例为ACS组,包括20例UAP组及30例AMI组；对照组为16例健康体检者。 (4)检测细胞培养上清液和血浆中的LDH、肌钙蛋白(CTnT)及肌酸激酶同工酶(CK-MB)及其他生化指标,MTT法测定细胞增值情况。 (5)采用2-AACT实时荧光定量PCR方法(quantitative real-time PCR qRT-PCR)定量测定细胞培养上清液及血浆中上述miRNAs的表达水平。 结果 1细胞培养上清液PBS组与处理组心肌增殖、损伤及上述miRNAs表达水平比较： (1)MTT结果显示与对照组比较,随着Triton X-100作用浓度的升高,心肌细胞H9c2的存活率分别为(100%,71%,23%和16%),呈现下降趋势(P0.05)。 (2)与PBS处理组比较,细胞培养上清液LDH表达量分别为(7.86±1.98、26.55±8.46、54.32±9.96、74.1±4.68)U/L,差异有统计学意义(P0.05)。 (3)与PBS处理组比较,细胞培养上清液CK-MB的表达量为(60.42±10.4、120.5±12.78、156.2±10.5、160.3±14.9)U/L,差异有统计学意义(P0.05)。 (4)与PBS处理组比较,细胞培养上清液1niR208b、miR328及miRl55相对表达量增加,差异有统计学意义(P0.05)；miR145相对表达量差异无统计学意义(P0.05)。除miR208b、miR155及miR328与LDH表达量呈相关性(P0.05)；miR-208b与CK-MB表达量呈相关性(P0.05)。 (5)细胞培养上清液miR-208b在6h,12h及24h表达水平为(19.3±3.25,18.7±2.36,18.21±1.21和18.1±2.3),差异无统计学意义(P0.05)。 2ACS组及对照组上述1niRNAs表达水平及比较： (1)ACS组血浆miR208b表达量为(265.70±256.24),miR328表达量为(8.12±3.81),与对照组表达量(1.00±0.00)比较显著上调,两组差异有统计学意义(P0.05)。 (2)ACS组血浆miR145表达量为(0.21±0.12),与对照组表达量(1.00±0.00)比较显著下调,差异有统计学意义(P0.05)。 (3)ACS组血浆miR155表达量为(1.00±0.26),与对照组表达量(1.00±0.00)比较,差异无统计学意义(P0.05)。 3AMI组与UAP组上述miRNAs表达水平及比较： (1)AMI组血浆miR208b表达量为(442.16±±174.38),UAP组表达量未检测出,两组差异有统计学意义(P0.05)。AMI组血浆miR328表达量为(10.69±2.17),UAP组表达量为(4.26±2.06),两组差异有统计学意义(P0.05)。 (2) AMI组血浆miR145表达量为(0.19±0.10),UAP组表达量为(0.25±0.14),两组差异无统计学意义。AMI组miR155表达量为(1.02±0.28),UAP组表达量为(0.96±0.22),两组差异无统计学意义(P0.05)。 结论 (1)随着Triton X-100浓度的增加,大鼠H9c2心肌细胞坏死数量增加,细胞上清液miR208b和miR328含量增加,心肌细胞坏死数量与细胞上清液miRNAs含量呈正相关性。 (2)ACS患者血浆miR208b、miR328及miR145可以从受损心肌细胞释放入血,导致血浆中相应表达水平变化。血浆miR208b及miR328的表达水平与CTnT呈正相关,可能作为急性冠脉综合征诊断及AMI与UAP鉴别诊断的敏感指标。
【关键词】：微小RNA 急性冠脉综合征(ACS) 大鼠H9c2心肌细胞
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R541.4
【目录】：

• 摘要4-8
• Abstract8-13
• 中英文~.略词表13-15
• 引言15-17
• 材料与方法17-28
• 材料17-22
• 实验方法22-28
• 实验结果28-39
• 讨论39-45
• 结论45-46
• 参考文献46-49
• 综述 microRNA的研究进展49-66
• 参考文献61-66
• 致谢66-67
• 个人简历、在校期间发表的学术论文与研究成果67

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 许婵婵;韩卫青;肖冰;李宁宁;朱鼎良;高平进;;微小RNA在自发性高血压大鼠主动脉的差异表达[J];生理学报;2008年04期

2 申华;周玉杰;;2011欧洲心脏病学会非ST段抬高型急性冠脉综合征处理指南更新解读[J];中国医学前沿杂志(电子版);2011年05期

  本文关键词：miR208b、328、145和155在大鼠H9c2细胞和ACS患者中的表达及意义，由笔耕文化传播整理发布。

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本文编号：253744