水蛭微粉防治动脉粥样硬化作用机制的研究

发布时间：2017-04-11 22:01

  本文关键词：水蛭微粉防治动脉粥样硬化作用机制的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:通过构建动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)大鼠病理模型,观察水蛭微粉对动脉粥样硬化大鼠体质量、血脂、生长因子、基质金属蛋白酶及血管平滑肌细胞不同表型标志物表达的影响,探讨其防治AS形成的作用及可能机制。方法:取健康雄性Wistar大鼠32只,适应性饲喂1周后随机分为4组:正常对照组、模型对照组、水蛭微粉低剂量组、水蛭微粉高剂量组,每组各8只。正常对照组饲喂普通饲料,其余三组均饲喂高脂饲料,在喂食高脂饲料之前,除正常对照组外其余各组大鼠一次性腹腔注射维生素D3注射液60万IU·kg-1建立AS大鼠模型,正常对照组予以腹腔注射等量生理盐水;高脂饲喂第二天水蛭微粉各治疗组开始按各自剂量药物混悬液灌胃,每天1次,正常对照组和模型对照组大鼠只灌胃等量蒸馏水。第5周第一天,高脂饲料各喂养组再次腹腔注射维生素D3注射液30万IU·kg-1,正常对照组予以腹腔注射等量生理盐水。每周称体质量一次,据体质量调整药物用量,持续8周。实验结束,处死所有大鼠,留取血清、主动脉等组织,检测血清低密度脂蛋胆固醇(low-density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein-cholesterol,HDL-C)及甘油三酯(triglycerides,TG)水平;用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测血清血小板源生长因子-BB(platelet derived growth factor-bb,PDGF-BB)和主动脉匀浆基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达;免疫组织化学法观察主动脉弓血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)表型标志物α-肌动蛋白(α-actin)和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的表达;将主动脉苏木素-伊红(HE)染色,光镜下观察其病理改变。结果:1.大鼠一般状况观察及体质量的改变:实验开始,各组大鼠进食、活动情况、体质量无明显差异;造模后,第7周模型对照组有1只大鼠因厌食、体质量下降死亡,其它各组均无死亡。实验过程中,正常对照组大鼠的进食量较稳定,体质量一直呈增长趋势;高脂饲料喂养2周后,模型对照组大鼠进食量不同程度下降,体质量明显增长缓慢,较正常对照组显著下降(P0.01);水蛭微粉各治疗组较模型对照组大鼠进食量较多,体质量增长较快,第5周之前体质量较模型对照组明显增加(P0.05或P0.01),第5周之后水蛭微粉治疗组较模型组大鼠体质量有所增加(P0.05),但差别无统计学意义。2.血清血脂水平的改变:模型对照组较正常对照组血清TC和LDL-C升高明显(P0.01),TG有所降低(P0.05),HDL-C升高(P0.05),差别无统计学意义;与模型对照组比较,水蛭微粉各治疗组TC和LDL-C明显降低(P0.05或P0.01);水蛭微粉高剂量组较低剂量组TC和LDL-C有所降低(P0.05),差异无统计学意义;水蛭微粉高剂量组较模型对照组TG明显升高(P0.05);水蛭微粉两治疗组较模型对照组HDL-C有降低趋势(P0.05),但差异无统计学意义。3.血清PDGF-BB表达水平的变化:与正常对照组比较,模型对照组PDGF-BB的表达水平明显升高(P0.01);水蛭微粉各治疗组较模型对照组PDGF-BB的表达量降低明显(P0.05或P0.01);水蛭微粉高剂量组较低剂量组PDGF-BB的表达水平有所降低(P0.05),但差异无统计学意义。4.主动脉匀浆MMP-2和MMP-9表达水平的变化:与正常对照组比较,模型对照组主动脉MMP-2和MMP-9的表达水平均显著升高(P0.01);与模型对照组相比,水蛭微粉各治疗组MMP-2和MMP-9的表达水平均降低明显(P0.05或P0.01);与水蛭微粉低剂量组比较,水蛭微粉高剂量组MMP-2和MMP-9的表达水平有降低趋势(P0.05),但差异无统计学意义。5.主动脉弓血管平滑肌细胞表型标志物α-actin表达的变化:正常对照组主动脉平滑肌细胞α-actin阳性染色均匀,模型对照组较正常对照组α-actin表达明显下降(P0.05);各水蛭微粉治疗组较模型对照组α-actin表达显著升高(P0.05或P0.01);水蛭微粉高剂量组较低剂量组α-actin表达有所升高(P0.05),但差异无统计学意义。6.主动脉壁OPN表达的变化:正常对照组主动脉壁OPN几乎不表达;模型对照组较正常对照组主动脉壁OPN表达明显增多(P0.01);各水蛭微粉治疗组较模型对照组OPN表达显著减少(P0.01);水蛭微粉高剂量组较低剂量组OPN表达明显降低(P0.05)。7.血清PDGF-BB与主动脉基质金属蛋白酶和平滑肌细胞表型标志物相关性分析:血清PDGF-BB的表达水平与主动脉MMP-2、MMP-9和OPN的表达水平呈正相关(P0.05),与SM-α-actin的表达呈负相关(P0.05)。8.主动脉形态学变化:HE染色可见,正常对照组大鼠主动脉弓各层结构均正常,内膜完整、光滑,中膜平滑肌细胞排列整齐,弹力纤维排列规则;模型对照组主动脉弓可见向腔内凸起的斑块,内膜增厚,平滑肌细胞增生,斑块内发生变性坏死,并有泡沫细胞形成,胆固醇结晶沉积;水蛭微粉各治疗组主动脉病变较模型对照组均有不同程度减轻,水蛭微粉低剂量组主动脉弓内膜下可见少量斑块形成,内膜平滑肌细胞数量较少,斑块内可见少量的泡沫细胞及胆固醇结晶沉积;水蛭微粉高剂量组主动脉弓中膜内可见少量胆固醇结晶沉积,未见内膜平滑肌细胞增殖,血管腔内未见斑块形成。结论:高脂饮食联合两次维生素D3注射液腹腔注射成功建立AS大鼠病理模型,符合脂质斑块形成、泡沫细胞形成、平滑肌细胞增生、胆固醇结晶沉积等AS病理改变;水蛭微粉防治AS形成的可能机制主要表现在:(1)水蛭微粉可减弱高负荷钙吸收对大鼠消化系统和血管内皮的损伤,改善大鼠体质量和内膜脂质沉积,消弱AS的诱因;(2)水蛭微粉可显著下调血清TC及LDL-C水平,减轻其对血管内皮的损伤和内膜脂质沉积;(3)水蛭微粉可降低血清PDGF-BB的表达,下调主动脉MMP-2、MMP-9的表达,抑制平滑肌细胞收缩表型标志物α-actin表达的减少,下调主动脉壁OPN的表达,抑制基底膜及细胞外基质的降解,减少脂质向血管内皮浸润和血管平滑肌细胞的迁移、表型转化,能够有效的干预AS的发生发展;(4)水蛭微粉对血管壁平滑肌细胞的表型转化、迁移的抑制作用可能与降低血清PDGF-BB的表达有关。
【关键词】：水蛭微粉 动脉粥样硬化 大鼠 血管平滑肌细胞 基质金属蛋白酶 血小板源生长因子 表型转化
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R543.5
【目录】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-13
• 缩略语/符号说明13-14
• 前言14-17
• 研究现状、成果14-16
• 研究目的、方法16-17
• 1.研究对象17-19
• 1.1 实验动物和饲料17
• 1.2 实验药物及试剂17-18
• 1.3 主要仪器18-19
• 2.研究方法19-26
• 2.1 动物分组及模型建立19-20
• 2.2 标本采集与保存20
• 2.3 血清及主动脉匀浆指标检测20-22
• 2.4 石蜡切片的制备22-23
• 2.5 大鼠主动脉免疫组织化学检测23-25
• 2.6 主动脉HE染色25
• 2.7 统计方法25-26
• 3.结果26-32
• 3.1 大鼠一般情况及体质量的改变26
• 3.2 各组大鼠血脂水平的变化26-27
• 3.3 各组大鼠血清血小板源生长因子-BB表达的变化27-28
• 3.4 各组大鼠主动脉匀浆MMP-2 和MMP-9 表达水平的变化28
• 3.5 各组大鼠主动脉平滑肌细胞 α-actin表达水平的免疫组织化学检测28-29
• 3.6 各组大鼠主动脉壁OPN表达水平的免疫组织化学检测29-31
• 3.7 血清PDGF-BB与动脉MMP-2、MMP-9 和平滑肌细胞表型标志物相关性分析31
• 3.8 各组大鼠主动脉弓病理改变31-32
• 4.讨论32-47
• 4.1 现代医学研究及传统医学理论对AS的认识32-34
• 4.2 动脉粥样硬化大鼠病理模型的建立34-35
• 4.3 水蛭微粉对动脉粥样硬化大鼠血脂水平的影响35-37
• 4.4 水蛭微粉对动脉粥样硬化大鼠血清血小板源生长因子-BB的影响37-38
• 4.5 水蛭微粉对动脉粥样硬化大鼠主动脉MMP-2和MMP-9表达水平的影响38-40
• 4.6 水蛭微粉对动脉粥样硬化大鼠主动脉平滑肌细胞表型标志物α-肌动蛋白表达水平的影响40-43
• 4.7 水蛭微粉对动脉粥样硬化大鼠主动脉壁OPN表达的影响43-44
• 4.8 PDGF-BB与血管平滑肌细胞表型转化、迁移和增殖的关系44-45
• 4.9 小结45-47
• 结论47-48
• 参考文献48-56
• 发表论文和参加科研情况说明56-57
• 综述 动脉粥样硬化中血管平滑肌细胞表型转化机制的研究进展57-73
• 综述参考文献65-73
• 致谢73-75
• 个人简历75

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8 石s，

本文编号：300038