NRAGE敲除小鼠肺动脉高压表型和机制的研究
发布时间：2021-08-11 17:31
MAGE-D1（NRAGE）,MAGE-G1和NECDIN是MAGEⅡ家族的成员。MAGE-G1以及NECDIN蛋白与神经系统发育有关,在小鼠中缺失后导致生长发育迟缓,性腺发育不良,表现为Prader-Willi综合征（PWS）。相关研究已经发现,NRAGE可以抑制肿瘤细胞的转移,NRAGE和P75NTR结合可调控依赖于神经元生长因子的凋亡。在小鼠实验中NRAGE的缺失会导致一系列表型发生变化,比如肥胖,生殖能力下降,小鼠寿命缩短等。在研究NRAGE敲除小鼠表型的过程中,通过超声心动,我们发现NRAGE敲除小鼠的肺动脉压明显高于野生小鼠,并且远远超出正常水平,而通过尾动脉介入法测量小鼠主动脉血压发现敲除小鼠主动脉血压也明显高于野生小鼠。通过组织切片发现,NRAGE敲除小鼠肺动脉血管壁和主动脉血管壁增厚。肺动脉高压是指静息时肺动脉平均压>25mmHg或运动时>30mmHg,是一种极其严重的疾病,由于肺血管重塑,肺动脉血管壁增厚引起肺循环血流动力学改变而导致右心衰竭,主要的症状包括:呼吸困难、乏力、腹胀、心绞痛、晕厥。按临床分类,肺动脉高压可分为特发性肺动脉高压、遗传性肺动脉高...
【文章来源】：南京师范大学江苏省 211工程院校
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１?Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠主动脉收缩压和肺动脉压的测量
Ｈ＆Ｅ染色不能确定增厚的是小鼠的肺动脉平滑肌，于是我们通过动脉平滑肌细??胞特异蛋白ａ－ａｃｔｉｎ来检测是否为肺动脉壁增厚。８个月大的小鼠肺组织进行石??蜡切片后，我们用抗体ａ?－ａｃｔｉｎ做ＩＨＣ分析，图２Ｂ说明ＫＯ型小鼠的肺动脉确??实是增厚了。??图２组织病理学和免疫组织化学分析小鼠肺动脉（２０Ｘ）。Ａ：?Ｈ＆Ｅ染色表明８个月大的年??老ＫＯ型小鼠肺动脉壁增生变厚。Ｂ：?ａ?－ａｃｔｉｎ免疫组织化学分析表明增生的确实为小鼠肺??动脉壁。??２．?３．?２．?３．?本节小结??通过小鼠组织形态学分析来检测小鼠肺动脉壁是否增厚，Ｈ＆Ｅ染色表明８??个月大的Ｋ０型小鼠肺动脉壁增厚，和超声心动得出的结论一致；为了更好的确??定８个月大的Ｋ０型小鼠肺动脉壁增厚，我们用免疫组织化学法分析了小鼠肺动??脉壁的情况，结果和Ｈ＆Ｅ染色的方法是一致的。这些结果证实了在小鼠肺组织??中，由于ＮＲＡＧＥ的缺失导致小鼠肺动脉血管壁变厚，最终导致肺动脉高压。??２．３．３．干扰ＮＲＡＧＥ促进ＶＳＭＣ细胞增殖??２．?３．３．１．检测ＮＲＡＧＥ的干扰水平??２２??
肌细胞从而干扰ＮＲＡＧＥ。我们设置了不同的梯度１０ｕＬ、２０ｕＬ、３０ｕＬ并在实验??中发现随着病毒使用滴度的增高，ＶＳＭＣ细胞的状态会发生改变。为了既能保证??干扰效率，又能不影响细胞状态，最后确定加入２０ｕＬ的病毒是最合适的。图３Ａ??显示了随着病毒滴度的逐渐增加，ＮＲＡＧＥ蛋白的表达逐渐减少，２０ｕＬ的病毒己??经能够达到实验所需的结果了。??２．?３．?３．?２．?ＭＴＴ检测ＶＳＭＧ细胞的增殖??ＮＲＡＧＥ敲除之后是否能够促进平滑肌细胞的增殖？为此用ＭＴＴ法分析检??测ＶＳＭＣ的细胞活力。加入相同病毒滴度并带ＥＧＦＰ标签的空载腺病毒作为对??照组，继续用腺病毒干扰ＶＳＭＣ细胞，同时设置几个时间段Ｏｈ，?２４ｈ，?４８ｈ，９６ｈ，??从而了解感染不同时间细胞增殖的水平。图３Ｂ显示，在感染２４ｈ后，干扰组细??胞增殖率开始增加，但是和对照组并没有显著性差异；随着感染时间的延长，感??染组的增殖率也在上升，干扰４８ｈ后，感染组增殖率明显大于对照组，Ｐ＝０．０２，??有显著性差异；在干扰７２ｈ后，干扰组的增殖率依然是大于对照组的，Ｐ＝０．０１４，??有显著性差异；但是干扰９６ｈ后，对照组的增殖率反而大于干扰组了，但是没有??显著性差异。我们觉得可能是因为一方面随着感染时间至９６ｈ
【参考文献】：
期刊论文
[1]欧洲心脏病协会2004年肺动脉高压诊断和治疗指南简介[J]. 王秋芬,廖玉华. 临床心血管病杂志. 2005(07)
本文编号：3336586
【文章来源】：南京师范大学江苏省 211工程院校
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１?Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠主动脉收缩压和肺动脉压的测量
Ｈ＆Ｅ染色不能确定增厚的是小鼠的肺动脉平滑肌，于是我们通过动脉平滑肌细??胞特异蛋白ａ－ａｃｔｉｎ来检测是否为肺动脉壁增厚。８个月大的小鼠肺组织进行石??蜡切片后，我们用抗体ａ?－ａｃｔｉｎ做ＩＨＣ分析，图２Ｂ说明ＫＯ型小鼠的肺动脉确??实是增厚了。??图２组织病理学和免疫组织化学分析小鼠肺动脉（２０Ｘ）。Ａ：?Ｈ＆Ｅ染色表明８个月大的年??老ＫＯ型小鼠肺动脉壁增生变厚。Ｂ：?ａ?－ａｃｔｉｎ免疫组织化学分析表明增生的确实为小鼠肺??动脉壁。??２．?３．?２．?３．?本节小结??通过小鼠组织形态学分析来检测小鼠肺动脉壁是否增厚，Ｈ＆Ｅ染色表明８??个月大的Ｋ０型小鼠肺动脉壁增厚，和超声心动得出的结论一致；为了更好的确??定８个月大的Ｋ０型小鼠肺动脉壁增厚，我们用免疫组织化学法分析了小鼠肺动??脉壁的情况，结果和Ｈ＆Ｅ染色的方法是一致的。这些结果证实了在小鼠肺组织??中，由于ＮＲＡＧＥ的缺失导致小鼠肺动脉血管壁变厚，最终导致肺动脉高压。??２．３．３．干扰ＮＲＡＧＥ促进ＶＳＭＣ细胞增殖??２．?３．３．１．检测ＮＲＡＧＥ的干扰水平??２２??
肌细胞从而干扰ＮＲＡＧＥ。我们设置了不同的梯度１０ｕＬ、２０ｕＬ、３０ｕＬ并在实验??中发现随着病毒使用滴度的增高，ＶＳＭＣ细胞的状态会发生改变。为了既能保证??干扰效率，又能不影响细胞状态，最后确定加入２０ｕＬ的病毒是最合适的。图３Ａ??显示了随着病毒滴度的逐渐增加，ＮＲＡＧＥ蛋白的表达逐渐减少，２０ｕＬ的病毒己??经能够达到实验所需的结果了。??２．?３．?３．?２．?ＭＴＴ检测ＶＳＭＧ细胞的增殖??ＮＲＡＧＥ敲除之后是否能够促进平滑肌细胞的增殖？为此用ＭＴＴ法分析检??测ＶＳＭＣ的细胞活力。加入相同病毒滴度并带ＥＧＦＰ标签的空载腺病毒作为对??照组，继续用腺病毒干扰ＶＳＭＣ细胞，同时设置几个时间段Ｏｈ，?２４ｈ，?４８ｈ，９６ｈ，??从而了解感染不同时间细胞增殖的水平。图３Ｂ显示，在感染２４ｈ后，干扰组细??胞增殖率开始增加，但是和对照组并没有显著性差异；随着感染时间的延长，感??染组的增殖率也在上升，干扰４８ｈ后，感染组增殖率明显大于对照组，Ｐ＝０．０２，??有显著性差异；在干扰７２ｈ后，干扰组的增殖率依然是大于对照组的，Ｐ＝０．０１４，??有显著性差异；但是干扰９６ｈ后，对照组的增殖率反而大于干扰组了，但是没有??显著性差异。我们觉得可能是因为一方面随着感染时间至９６ｈ
【参考文献】：
期刊论文
[1]欧洲心脏病协会2004年肺动脉高压诊断和治疗指南简介[J]. 王秋芬,廖玉华. 临床心血管病杂志. 2005(07)
本文编号：3336586
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