Ghrelin预处理对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响
发布时间：2021-08-11 18:41
目的探讨Ghrelin预处理对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响。方法培养H9C2心肌细胞并建立心肌细胞缺氧（21 h）/复氧（6 h）模型。细胞随机分成4组:对照组,缺氧/复氧组（H/R组）,缺氧/复氧+Ghrelin组（H/R+G组）,缺氧/复氧+Ghrelin+生长激素促分泌素受体（GHSR）-siRNA组（H/R+G+G-siRNA组）;采用siRNA干扰技术阻断Ghrelin受体GHSR的表达以及Hoechst 33258染色剂和流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blot法检测各组凋亡相关蛋白表达情况。结果 GHSR存在于正常H9C2心肌细胞中,GHSR-siRNA可以显著抑制H9C2心肌细胞中GHSR的表达。与H/R组相比,在H/R+G组中缺氧/复氧损伤所导致心肌细胞的凋亡率明显下降（P<0.05）,B淋巴细胞瘤-2蛋白/Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2/Bax）比率明显上调（P<0.05）,含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（caspase-3）表达水平被显著抑制（P<0.05）。而与H/R+G组相比,H/R+G+G-siRNA组心肌细胞凋...
【文章来源】：安徽医科大学学报. 2015,50(08)北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
GHSＲ在H9C2心肌细胞中的表达情况(n=8)
组(阴性对照组)中未见明显的抑制作用。见图1。图1GHSＲ在H9C2心肌细胞中的表达情况(n=8)A:空白对照组;B:scrambledsiＲNA组;C:GHSＲ-siＲNA组2．2Ghrelin预处理对H9C2心肌细胞凋亡的影响由Hoechst33258染色可见，对照组细胞核呈弥散均匀暗淡的蓝色荧光;而H/Ｒ组可见典型的凋亡细胞核表现，即细胞核固缩、变亮、变圆、呈蓝白色荧光，呈现明显的凋亡特征;而H/Ｒ+G组凋亡细胞明显减少，H/Ｒ+G+G-siＲNA组凋亡细胞较H/Ｒ+G组增多，见图2。AnnexinV-FITC/PI检测显示，H/Ｒ组心肌细胞凋亡率显著高于对照组(P＜0.05)，H/Ｒ+G组心肌细胞凋亡率显著低于H/Ｒ组(P＜0.05)，而H/Ｒ+G+G-siＲNA组凋亡率明显高于H/Ｒ+G组(P＜0.05)。见图3、表1。图2各处理组心肌细胞凋亡情况Hoechst33258染色×400(n=5)A:对照组;B:H/Ｒ组;C:H/Ｒ+G组;D:H/Ｒ+G+G-siＲNA组;凋亡细胞阳性染色定位于细胞核，荧光下呈亮蓝白色(如箭头所示)图3流式细胞仪检测H9C2心肌细胞凋亡变化A:对照组;B:H/Ｒ组;C:H/Ｒ+G组;D:H/Ｒ+G+G-siＲNA组;与对照组比较:*P＜0.05;与H/Ｒ组比较:#P＜0.05;与H/Ｒ+G组比较:△P＜0.052．3Ghrelin预处理对于H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤后Bcl-2和Bax以及cleavedcaspase-3蛋白表达的影响H/Ｒ组相对于对照组Bcl-2蛋白表达水平显著下降，而Bax蛋白水平显著升高，所以Bcl-2/Bax显著降低(P＜0.05);而予以Ghrelin预处理后，Bcl-2蛋白表达量显著升高，同时Bax蛋白表达量显著下降，Bcl-2/Bax也相应上升(P＜0.05)。与G+H/Ｒ组相比，用siＲNA抑制GHSＲ表达可以使得H/Ｒ后H9C2心肌细胞Bcl-2蛋白表达水平下降而Bax蛋白表达水平显著升高，Bcl-2/Bax相应降低(P＜0.05)。同样，在H/Ｒ组中caspase-3蛋白表达水平相对于对照组显著升高(P＜0.05)，而?
:scrambledsiＲNA组;C:GHSＲ-siＲNA组2．2Ghrelin预处理对H9C2心肌细胞凋亡的影响由Hoechst33258染色可见，对照组细胞核呈弥散均匀暗淡的蓝色荧光;而H/Ｒ组可见典型的凋亡细胞核表现，即细胞核固缩、变亮、变圆、呈蓝白色荧光，呈现明显的凋亡特征;而H/Ｒ+G组凋亡细胞明显减少，H/Ｒ+G+G-siＲNA组凋亡细胞较H/Ｒ+G组增多，见图2。AnnexinV-FITC/PI检测显示，H/Ｒ组心肌细胞凋亡率显著高于对照组(P＜0.05)，H/Ｒ+G组心肌细胞凋亡率显著低于H/Ｒ组(P＜0.05)，而H/Ｒ+G+G-siＲNA组凋亡率明显高于H/Ｒ+G组(P＜0.05)。见图3、表1。图2各处理组心肌细胞凋亡情况Hoechst33258染色×400(n=5)A:对照组;B:H/Ｒ组;C:H/Ｒ+G组;D:H/Ｒ+G+G-siＲNA组;凋亡细胞阳性染色定位于细胞核，荧光下呈亮蓝白色(如箭头所示)图3流式细胞仪检测H9C2心肌细胞凋亡变化A:对照组;B:H/Ｒ组;C:H/Ｒ+G组;D:H/Ｒ+G+G-siＲNA组;与对照组比较:*P＜0.05;与H/Ｒ组比较:#P＜0.05;与H/Ｒ+G组比较:△P＜0.052．3Ghrelin预处理对于H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤后Bcl-2和Bax以及cleavedcaspase-3蛋白表达的影响H/Ｒ组相对于对照组Bcl-2蛋白表达水平显著下降，而Bax蛋白水平显著升高，所以Bcl-2/Bax显著降低(P＜0.05);而予以Ghrelin预处理后，Bcl-2蛋白表达量显著升高，同时Bax蛋白表达量显著下降，Bcl-2/Bax也相应上升(P＜0.05)。与G+H/Ｒ组相比，用siＲNA抑制GHSＲ表达可以使得H/Ｒ后H9C2心肌细胞Bcl-2蛋白表达水平下降而Bax蛋白表达水平显著升高，Bcl-2/Bax相应降低(P＜0.05)。同样，在H/Ｒ组中caspase-3蛋白表达水平相对于对照组显著升高(P＜0.05)，而这种升高在H/Ｒ+G组中被显著抑制(P＜0.05)，然而在H/Ｒ+G+G-siＲNA组中caspase-3蛋白表达量升高(P＜0.
本文编号：3336686
【文章来源】：安徽医科大学学报. 2015,50(08)北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
GHSＲ在H9C2心肌细胞中的表达情况(n=8)
组(阴性对照组)中未见明显的抑制作用。见图1。图1GHSＲ在H9C2心肌细胞中的表达情况(n=8)A:空白对照组;B:scrambledsiＲNA组;C:GHSＲ-siＲNA组2．2Ghrelin预处理对H9C2心肌细胞凋亡的影响由Hoechst33258染色可见，对照组细胞核呈弥散均匀暗淡的蓝色荧光;而H/Ｒ组可见典型的凋亡细胞核表现，即细胞核固缩、变亮、变圆、呈蓝白色荧光，呈现明显的凋亡特征;而H/Ｒ+G组凋亡细胞明显减少，H/Ｒ+G+G-siＲNA组凋亡细胞较H/Ｒ+G组增多，见图2。AnnexinV-FITC/PI检测显示，H/Ｒ组心肌细胞凋亡率显著高于对照组(P＜0.05)，H/Ｒ+G组心肌细胞凋亡率显著低于H/Ｒ组(P＜0.05)，而H/Ｒ+G+G-siＲNA组凋亡率明显高于H/Ｒ+G组(P＜0.05)。见图3、表1。图2各处理组心肌细胞凋亡情况Hoechst33258染色×400(n=5)A:对照组;B:H/Ｒ组;C:H/Ｒ+G组;D:H/Ｒ+G+G-siＲNA组;凋亡细胞阳性染色定位于细胞核，荧光下呈亮蓝白色(如箭头所示)图3流式细胞仪检测H9C2心肌细胞凋亡变化A:对照组;B:H/Ｒ组;C:H/Ｒ+G组;D:H/Ｒ+G+G-siＲNA组;与对照组比较:*P＜0.05;与H/Ｒ组比较:#P＜0.05;与H/Ｒ+G组比较:△P＜0.052．3Ghrelin预处理对于H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤后Bcl-2和Bax以及cleavedcaspase-3蛋白表达的影响H/Ｒ组相对于对照组Bcl-2蛋白表达水平显著下降，而Bax蛋白水平显著升高，所以Bcl-2/Bax显著降低(P＜0.05);而予以Ghrelin预处理后，Bcl-2蛋白表达量显著升高，同时Bax蛋白表达量显著下降，Bcl-2/Bax也相应上升(P＜0.05)。与G+H/Ｒ组相比，用siＲNA抑制GHSＲ表达可以使得H/Ｒ后H9C2心肌细胞Bcl-2蛋白表达水平下降而Bax蛋白表达水平显著升高，Bcl-2/Bax相应降低(P＜0.05)。同样，在H/Ｒ组中caspase-3蛋白表达水平相对于对照组显著升高(P＜0.05)，而?
:scrambledsiＲNA组;C:GHSＲ-siＲNA组2．2Ghrelin预处理对H9C2心肌细胞凋亡的影响由Hoechst33258染色可见，对照组细胞核呈弥散均匀暗淡的蓝色荧光;而H/Ｒ组可见典型的凋亡细胞核表现，即细胞核固缩、变亮、变圆、呈蓝白色荧光，呈现明显的凋亡特征;而H/Ｒ+G组凋亡细胞明显减少，H/Ｒ+G+G-siＲNA组凋亡细胞较H/Ｒ+G组增多，见图2。AnnexinV-FITC/PI检测显示，H/Ｒ组心肌细胞凋亡率显著高于对照组(P＜0.05)，H/Ｒ+G组心肌细胞凋亡率显著低于H/Ｒ组(P＜0.05)，而H/Ｒ+G+G-siＲNA组凋亡率明显高于H/Ｒ+G组(P＜0.05)。见图3、表1。图2各处理组心肌细胞凋亡情况Hoechst33258染色×400(n=5)A:对照组;B:H/Ｒ组;C:H/Ｒ+G组;D:H/Ｒ+G+G-siＲNA组;凋亡细胞阳性染色定位于细胞核，荧光下呈亮蓝白色(如箭头所示)图3流式细胞仪检测H9C2心肌细胞凋亡变化A:对照组;B:H/Ｒ组;C:H/Ｒ+G组;D:H/Ｒ+G+G-siＲNA组;与对照组比较:*P＜0.05;与H/Ｒ组比较:#P＜0.05;与H/Ｒ+G组比较:△P＜0.052．3Ghrelin预处理对于H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤后Bcl-2和Bax以及cleavedcaspase-3蛋白表达的影响H/Ｒ组相对于对照组Bcl-2蛋白表达水平显著下降，而Bax蛋白水平显著升高，所以Bcl-2/Bax显著降低(P＜0.05);而予以Ghrelin预处理后，Bcl-2蛋白表达量显著升高，同时Bax蛋白表达量显著下降，Bcl-2/Bax也相应上升(P＜0.05)。与G+H/Ｒ组相比，用siＲNA抑制GHSＲ表达可以使得H/Ｒ后H9C2心肌细胞Bcl-2蛋白表达水平下降而Bax蛋白表达水平显著升高，Bcl-2/Bax相应降低(P＜0.05)。同样，在H/Ｒ组中caspase-3蛋白表达水平相对于对照组显著升高(P＜0.05)，而这种升高在H/Ｒ+G组中被显著抑制(P＜0.05)，然而在H/Ｒ+G+G-siＲNA组中caspase-3蛋白表达量升高(P＜0.
本文编号：3336686
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