髓系肿瘤患者中TET2基因突变分析及DNA双加氧酶研究

发布时间：2017-05-05 08:11

  本文关键词：髓系肿瘤患者中TET2基因突变分析及DNA双加氧酶研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:髓系肿瘤(Myeloid tumor)是一类造血干细胞起源的骨髓克隆性疾病,是一类恶性血液系统疾病的总称。其包括有急性髓细胞白血病(acute myelocytic leukemia,AML),骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes,MDS),慢性骨髓增殖性肿瘤(chronic myeloproliferative neoplasms,cMPN)等,cMPN又包括原发性血小板增多症(essential thrombocythemia,ET)、真性红细胞增多症(polycythemiavera,PV)和原发性骨髓纤维化(primary myelofibrosis,PMF)等。近年来研究发现,Ten-eleven translocation-2(TET2)基因,在AML、MDS和cMPN等多种血液系统肿瘤中存在频繁突变。这些肿瘤患者基因启动子区的高甲基化状态进一步导致抑癌基因转录沉默,可能是恶性肿瘤患者中抑癌基因失活最常见的原因。DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,DNMT)催化的启动子区域甲基化与TET蛋白催化的主动去甲基化过程存在一种动态平衡。大量数据表明,血液系统恶性肿瘤中存在DNA甲基化紊乱,除DNMT相关基因的作用外,TET2基因的突变、功能缺失可能亦与造血系统恶性肿瘤的发生、发展密切相关。本实验通过检测初治髓系肿瘤患者TET2基因突变情况,了解髓系肿瘤患者中TET2基因的突变率及突变类型,同时对髓系肿瘤患者的TET2mRNA水平、TET2蛋白水平以及患者5羟甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine,5-hm C)水平进行测定,并分析其与TET2基因突变的相关性,从而了解髓系肿瘤患者TET2基因突变与TET2基因表达及蛋白活性之间的关系,并探讨其突变与造血功能调控异常及髓系肿瘤发生、发展之间的内在联系。方法:选取2015年2月至2016年1月于河北医科大学第二医院血液内科门诊及住院部就诊的初治和缓解后的AML(非APL)、MDS及cMPN患者。其中初治AML患者40例,男性患者23例,女性患者17例,年龄16-70岁,中位年龄40岁;缓解后AML患者16例,年龄18-67岁,中位年龄39岁;MDS患者15例,其中男性患者8例,女性患者7例,年龄20-64岁,中位年龄56岁;MPN患者15例,其中男性患者9例,女性患者6例,年龄35-69岁,中位年龄48岁。同时筛选17例血液系统非恶性疾病患者作为对照,男9例,女8例,年龄16-59岁,中位年龄为37岁。应用基因测序及RQ-PCR方法分别检测患者骨髓液单个核细胞中TET2突变状态和mRNA表达水平,同时采用Western Blot方法检测TET2蛋白表达水平以及样本基因组内5-hm C含量的高低。结果:1 TET2基因突变检测结果40例初治AML患者中有7例存在TET2基因突变,突变率为17.5%(7/40)。依据患者年龄、性别以及WHO分型进行分组。突变组患者中位年龄为34岁(20-69),非突变组患者中位年龄为44岁(16-70),二者无统计学意义(P=0.807)。突变组男、女比例为1.33(4/3),非突变组男、女比例为1.35(19/14),二者之间无统计学差异(P=0.983)。依据WHO分型,40例AML患者中M2、M4及M5亚型人数分别为15例、13例和12例;上述三种AML亚型中TET2突变阳性人数分别为3例、2例和2例,突变阴性患者人数分别为12例、11例和10例,突变患者在WHO分型中的分布无统计学差异(P=0.879)。依据NCCN2014指南,可将40例初治AML患者分为预后良好组、中等组和预后不良组,人数分别为10例、24例和6例,其中TET2突变阳性人数分别为2例、5例和0例,突变阴性患者为8例、19例和6例,比较AML患者中TET2突变与未突变患者的预后分级,两者无统计学差异(P=0.485)。对于初治AML患者予以蒽环类为主的联合化疗进行诱导缓解治疗,TET2基因突变组和非突变组完全缓解(CR)率分别为57.14%和84.85%,二组比较无统计学差异(P=0.261)。15例MDS患者,发现有2例存在TET2基因突变,突变率为13.33%。其中1例患者为MDS-RCMD亚型,另1例患者为MDS-RAEB2型。15例cMPN患者中包括3例MF患者、7例ET患者和5例PV患者。对上述cMPN患者进行TET2基因突变检测,仅在1例PV患者样本中发现TET2突变。受检cMPN患者的TET2基因突变率为6.67%。综上,在本研究受检的髓系肿瘤患者中,AML、MDS和cMPN的TET2基因突变率分别为17.5%、13.33%和6.67%。2 髓系肿瘤患者中TET2 mRNA表达情况与正常对照组相比,40例初治AML病例(0.817±0.09vs.0.414±0.069;P0.01)、MPN病例(0.817±0.09 vs.0.469±0.073;P0.01)和MDS病例(0.817±0.09 vs.0.320±0.028;P0.01)mRNA表达量均明显降低,有统计学差异。16例取得完全缓解的AML患者TET2 mRNA水平与40例初治AML患者相比有所升高(0.769±0.082 vs.0.414±0.069;P0.01),与对照组无明显差别(0.769±0.082 vs.0.817±0.09;P0.05)。40例初治AML中7例TET突变阳性患者TET2 mRNA相对表达量与突变阴性患者对比无统计学意义(0.461±0.035 vs.0.405±0.071;P0.05)。3 TET2蛋白表达情况与对照组相比,初治AML患者TET2蛋白表达水平(0.837±0.078 vs.0.329±0.034;P0.01)、MPN患者TET2蛋白表达水平(0.837±0.078 vs.0.517±0.071;P0.01)和MDS患者TET2蛋白表达水平(0.837±0.078 vs.0.269±0.018;P0.01)均明显降低,差异有统计学意义。16例CR AML患者的TET2蛋白水平与对照组相比,无明显差别(0.788±0.079 vs.0.837±0.078;P0.05)。7例TET2基因突变阳性初治AML患者TET2蛋白相对表达水平(0.310±0.030)与33例突变阴性患者表达水平(0.334±0.034)对比,二者之间无统计学意义(P0.05)4 5-hm C含量检测40例初治AML患者基因组5-hm C含量为(0.063±0.011)%,15例cMPN患者5-hm C含量为(0.081±0.021)%,15例MDS患者5-hm C含量为(0.013±0.003)%,对照组5-hm C含量(0.128±0.026)为%。各实验组5-hm C含量表达均低于对照组(P0.01,P0.01,P0.01)。16例CR患者5-hm C浓度水平为(0.094±0.04)%,诱导化疗后取得CR的AML患者5-hm C含量高于初治患者(P0.01)。7例TET2基因突变阳性初治AML患者5-hm C含量(0.054±0.013)%与突变阴性患者含量(0.065±0.025)%对比,二者之间无统计学意义(P0.05)。结论:1 TET2基因在AML(非APL)患者、MDS患者和cMPN患者中均检测到突变发生,以AML的突变发生率最高。但MDS患者突变种类最多。2 在受检的髓系肿瘤患者中,TET2 mRNA表达水平和TET2蛋白含量以及5-hm C浓度均较正常对照组有所降低。推测TET2基因表达的缺失与髓系肿瘤的发生、发展有相关性。3 存在TET2基因突变的AML(非APL)患者,诱导化疗后,完全缓解率较非突变患者无明显差异。4 治疗后达完全缓解的AML患者与初治AML患者相比,TET2 mRNA水平和5-hm C水平均有升高,可能与患者体内肿瘤负荷减少相关。
【关键词】：髓系肿瘤 去甲基化 TET2突变 DNA双加氧酶 5-hmC
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R733
【目录】：

• 摘要4-8
• ABSTRACT8-12
• 英文缩写12-13
• 前言13-14
• 材料与方法14-23
• 结果23-27
• 附图27-35
• 附表35-42
• 讨论42-44
• 结论44-45
• 参考文献45-47
• 综述 髓系肿瘤细胞中TET2基因突变分析及DNA加氧酶功能研究47-58
• 参考文献55-58
• 致谢58-59
• 个人简历59

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 Wei Zhang;Zong-hong Shao;Rong Fu;Hua-quan Wang;Li-juan Li;Jun Wang;Wen Qu;Yong Liang;Guo-jin Wang;Xiao-ming Wang;Yuhong Wu;Hong Liu;Jia Song;Jing Guan;Li-min Xing;;TET2 Expression in Bone Marrow Mononuclear Cells of Patients with Myelodysplastic Syndromes and Its Clinical Significances[J];Cancer Biology & Medicine;2012年01期

  本文关键词：髓系肿瘤患者中TET2基因突变分析及DNA双加氧酶研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：345992