TRPV1调控血管平滑肌细胞增殖的作用及其机制研究

发布时间：2017-05-10 12:16

  本文关键词：TRPV1调控血管平滑肌细胞增殖的作用及其机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景和目的:慢性高血压过程可引起血管中膜及内膜增厚,血管壁腔比值增加,并最终导致肥厚性内向性血管重构(vascular remodeling,VR)。关于血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)的研究众多,其异常增殖是血管重构的重要病理机制之一。正常情况下的VSMCs位于动脉中层,表达多种收缩蛋白以发挥其收缩功能,并不具备增殖和迁移的能力。但在持续性高血压等因素刺激下,VSMCs可发生活化,进而获得增殖和迁移能力,分泌多种细胞外基质,启动了血管重构过程。重构的血管反过来促进高血压的发展,进而影响心、脑、肾等重要靶器官的血供导致靶器官损害。因此,有效抑制VSMCs异常增殖对于防治高血压动脉重构及靶器官损害具有重要意义。近年来,瞬时受体电位香草醛亚家族1(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)在高血压发生、发展中的作用逐渐受到重视。TRPV1为瞬时受体电位(transient receptor potential,TRP)家族中V亚家族中的一个成员,在脂肪细胞、血管内皮细胞、VSMCs、心肌成纤维细胞等中均有表达,能被辣椒素强效激活。长期食用辣椒素激活TRPV1后可以改善阻力血管的内皮舒张功能,降低自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)的血压。研究发现,辣椒素激活TRPV1后可以抑制血管紧张素II诱导的小鼠心肌成纤维细胞的增殖,说明TRPV1对细胞增殖具有抑制作用。目前,TRPV1对于VSMCs的增殖,特别是高血压状态下的VSMCs增殖的作用尚不清楚。由此,本课题着重探索TRPV1激活是否可以抑制SHR胸主动脉VSMCs的增殖进而调控高血压状态下的血管重构。PI3K/Akt信号通路参与了细胞增殖、生长等的调控。研究发现,大麻二酚可以激活结肠癌细胞中TRPV1受体,从而抑制由氧化偶氮甲烷诱导的Akt磷酸化过程。因此,我们进一步推测,TRPV1激活可能通过抑制PI3K/Akt信号通路抑制高血压状态下VSMCs的增殖,从而改善高血压的血管重构。为了证实以上假设,我们的研究分为3部分。第一部分原代培养SHR和Wistar Kyoto大鼠(WKY)来源的VSMC s并进行鉴定。第二部分观察TRPV1激活对VSMCs增殖的影响。第三部分初步探讨TRPV1激活对VSMCs增殖影响的可能机制。方法:1.培养SHR和WK Y原代VSMCs用组织块贴块法,鉴定VSMC s用细胞免疫荧光染色;2.细胞增殖检测用CCK-8法;3.细胞蛋白表达水平检测用Western blot法。结果:1.原代培养及鉴定SHR及WKY来源的VSMC s。2.SHR-VSMCs和WKY-VSMCs中均有TRPV1表达,与WKY-VSMCs相比,SHR-VSMC s中TRPV1蛋白表达显著降低;应用TRPV1激动剂辣椒素可显著上调SHR-VSMCs、WKY-VSMCs中TRPV1蛋白的表达。3.SHR-VSMC s的增殖能力强于WKY-VSMCs;辣椒素可呈剂量依赖性地抑制SHR-VSMC s增殖,TRPV1的拮抗剂iRTX可拮抗辣椒素抗增殖的作用;辣椒素轻度抑制WKY-VSMCs增殖,与对照组相比,没有显著差异。4.与WK Y-VSMC s相比,SHR-VSMCs中p-Akt水平显著升高;辣椒素激活TRPV1可显著降低WKY-VSMCs和SHR-VSMCs中p-Akt水平;TRPV1拮抗剂iRTX,则使WKY-VSMCs、SHR-VSMCs中p-Akt水平升高。5.PI3K的特异抑制剂LY294002,可显著抑制SHR-VSMCs增殖;同单用辣椒素相比,LY294002+辣椒素组对SHR-VSMCs增殖的抑制作用无明显差异;对于WKY-VSMCs增殖,LY294002的抑制作用不显著。6.LY294002组、LY294002和辣椒素组均显著降低WK Y和SHR-VSMC s中p-Akt的水平;LY294002和辣椒素组的p-Akt的水平,与单用辣椒素组相比,显著降低。结论:激活TRPV1通过抑制Akt信号通路而抑制SHR-VSMCs的增殖。
【关键词】：TRPV1 自发性高血压大鼠 血管平滑肌细胞 细胞增殖
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R544.1
【目录】：

• 缩略语表4-6
• 英文摘要6-9
• 中文摘要9-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 大鼠血管平滑肌细胞的原代培养及鉴定13-21
• 2.1 材料与方法13-17
• 2.2 结果17-19
• 2.3 讨论19-20
• 2.4 小结20-21
• 第三章 激活TRPV1抑制高血压大鼠来源的血管平滑肌细胞增殖21-31
• 3.1 材料与方法22-27
• 3.2 结果27-28
• 3.3 讨论28-30
• 3.4 小结30-31
• 第四章 激活TRPV1通过抑制PI3K/Akt信号通路抑制高血压大鼠来源的血管平滑肌细胞增殖31-37
• 4.1 材料与方法32-33
• 4.2 结果33-35
• 4.3 讨论35-36
• 4.4 小结36-37
• 全文结论37-38
• 参考文献38-41
• 文献综述TRPV1和心血管重构41-49
• 参考文献46-49
• 攻读硕士学位期间发表论文49-50
• 致谢50

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本文编号：354751