NgBR对RAW264.7源性泡沫细胞胆固醇逆转运的影响及机制

发布时间：2017-05-13 02:00

  本文关键词：NgBR对RAW264.7源性泡沫细胞胆固醇逆转运的影响及机制，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:通过转染小干扰RNA(siRNA)沉默RAW264.7细胞源性泡沫细胞神经轴突生长抑制因子-B受体(NgBR)表达,研究NgBR对泡沫细胞胆固醇逆转运(RCT)的影响及机制,探索从RCT方面阻止动脉粥样硬化发生发展的新方法,为冠状动脉粥样硬化性心脏病的临床预防和治疗提供新的途径和思路。方法:利用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导RAW264.7细胞使其成为荷脂细胞,再用油红O染色从形态方面鉴定其是否为泡沫细胞。鉴定后将泡沫细胞分为4组,分别为:空白对照组(CON)、siRNA阴性对照组(NC)、NgBR-siRNA1转染组(siNgBR-1)、NgBR-siRNA2转染组(siNgBR-2)。利用siRNA沉默泡沫细胞NgBR基因的表达,并利用实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)和蛋白质印记法(Western blot)分别检测上述4组细胞表达NgBR的相对mRNA和蛋白质含量,对其进行干扰效率的鉴定。随后采用Real-time PCR检测以上4组细胞肝脏X受体α(LXRα)、三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)、三磷酸腺苷结合转运体G1(ABCG1)mRNA含量;Western blot检测上述4组相应蛋白质含量;利用液体闪烁计数仪从表观现象方面检测各组细胞相应的胆固醇流出率。结果:ox-LDL成功诱导泡沫细胞形成;与CON组、NC组相比,siNgBR-1组和siNgBR-2组NgBR的mRNA和蛋白表达均明显下调(P0.05);与CON组、NC组相比,siNgBR-1组和siNgBR-2组RCT相关基因——LXRα、ABCA1、ABCG1的mRNA及其蛋白表达显著降低(P0.05),胆固醇流出率显著减少(P0.05)。结论:NgBR可以增加RAW264.7细胞源性泡沫细胞胆固醇逆转运的调控基因LXRα及其下游基因ABCA1、ABCG1的表达,促进胆固醇流出,从而减弱或者避免AS的发生和发展,为冠状动脉粥样硬化性心脏病的临床预防和治疗提供理论依据。
【关键词】：神经轴突生长抑制因子-B受体 胆固醇逆转运 动脉粥样硬化 泡沫细胞
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R541.4
【目录】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 常用缩写词中英文对照表10-11
• 前言11-13
• 1 材料和方法13-25
• 1.1 实验细胞13
• 1.2 实验试剂13-14
• 1.3 实验仪器14-15
• 1.4 主要溶液配制15-17
• 1.5 细胞培养17
• 1.6 泡沫细胞模型的鉴定17
• 1.7 实验分组处理17-18
• 1.8 siRNA转染及转染效率的检测18
• 1.9 RNA提取和Real-time PCR检测各指标mRNA水平18-21
• 1.10 细胞总蛋白提取和Western-blot检测各指标蛋白水平21-24
• 1.11 液体闪烁计数仪检测细胞内胆固醇流出率24
• 1.12 统计学分析24-25
• 2 结果25-33
• 2.1 巨噬细胞和泡沫细胞的形态25
• 2.2 泡沫细胞转染效率的检测25-26
• 2.3 检测siRNA干扰目的基因表达的效果26-28
• 2.4 NgBR对RAW264.7 源性泡沫细胞胆固醇逆转运相关基因表达的影响28-31
• 2.5 NgBR对RAW264.7 源性泡沫细胞胆固醇流出的影响31-33
• 3 讨论33-37
• 4 结论37-38
• 参考文献38-41
• 综述41-53
• 参考文献（综述）49-53
• 致谢53-54
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果54-55
• 个人简历55

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本文编号：361290