MicroRNA-29a对心肌成纤维细胞活化增殖的调控机制研究

发布时间：2017-05-15 12:16

  本文关键词：MicroRNA-29a对心肌成纤维细胞活化增殖的调控机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的心房颤动(Atrial fibrillation,AF)属于快速型心律失常,在临床上的发病几率最高,其发生发展和转归的分子机制是心血管疾病领域的研究重点。心房颤动的病理生理学基础是心肌纤维化,其可导致心房颤动及其他心律失常的发生与持续。心脏微小RNAs是一类与心血管疾病密切相关的micro RNAs,已有相关研究表明,心肌纤维化与此类micro RNAs之间存在一定的相关关系。本实验旨在检测micro RNA-29a及其下游调控基因血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor A,VEGF-A)在Sprague-Dawley大鼠心肌成纤维细胞中的表达变化,研究micro RNA-29a mimics和micro RNA-29a inhibitor对Sprague-Dawley大鼠心肌成纤维细胞活化增殖的影响,探究micro RNA-29a在心房颤动心肌纤维化过程中潜在的分子机制。方法Sprague-Dawley大鼠腹部皮下注射异丙肾上腺素(ISO)造模,以制备Sprague-Dawley大鼠心肌纤维化模型。随机将60只SPF级别雄性Sprague-Dawley大鼠分为空白组和实验组,其中空白组30只,实验组30只。实验组给予腹部皮下注射ISO 10mg/kg?d,空白组给予等剂量生理盐水腹部皮下注射,标记并连续注射2周后人工处死,无菌环境下取出心脏,获取各组离体心脏标本并标注记号。利用Lipofectamine?2000 Reagent试剂,将micro RNA-29a mimics和inhibitor及其阴性对照瞬时转染进大鼠心肌成纤维细胞,24~48 h后检测各项相关指标。用HE染色法和Masson染色法计算大鼠离体心脏标本中的心肌纤维化程度及胶原容积分数(CVF);Quantitative Real time PCR检测各组micro RNA-29a,Col1A1和VEGF-A的m RNA表达水平;Western blot法测定Col1A1和VEGF-A蛋白水平的表达;MTT法检测micro RNA-29a mimics和inhibitor对心肌成纤维细胞活化增殖的影响。结果在体内实验中,与空白组对比,HE染色和Masson染色结果显示实验组中Sprague-Dawley大鼠离体心脏标本间质中出现明显的胶原纤维增生。计算心肌间质胶原容积分数(CVF)对比空白组显示出明显的增加改变。在体外实验中,分别与空白组和阴性对照组对比,micro RNA-29a的表达水平在瞬时转染micro RNA-29a mimics组中则表达上调,而在实验组和瞬时转染micro RNA-29a inhibitor组中表达降低;Col1A1的表达水平在瞬时转染micro RNA-29a mimics组中则表达下调,而在实验组和瞬时转染micro RNA-29a inhibitor组中表达上调;VEGF-A的表达水平在瞬时转染micro RNA-29a mimics组中则表达下调,而在实验组和瞬时转染micro RNA-29a inhibitor组中表达上调。在瞬时转染micro RNA-29a mimics处理后24h和48h检测,发现心肌成纤维细胞的增殖活力在转染组显著降低;而瞬时转染micro RNA-29a inhibitors 24和48 h后,心肌成纤维细胞增殖活力则明显增强。结论皮下注射ISO能诱导Sprague-Dawley大鼠心肌发生明显的心肌纤维化,心肌组织中micro RNA-29a的高表达可降低VEGF-A的表达,从而抑制心肌纤维化的发生。micro RNA-29a mimics可明显降低心肌成纤维细胞的增殖活性,micro RNA-29a inhibitor则明显增强心肌成纤维细胞的增殖活性。这进一步说明micro RNA-29a是心肌成纤维细胞活化增殖的潜在靶点,从而成为心房颤动发生发展机制中的一个至关重要的分子信号,可以为预防心肌纤维化和延缓其相关疾病如心房颤动的进展甚至逆转其病理改变提供新的思路。
【关键词】：心房颤动 心肌纤维化 心肌成纤维细胞 MicroRNA-29a ColA1 VEGF-A
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R541.7
【目录】：

• 英文缩略词表(Abbreviation)5-6
• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 1 引言10-12
• 2 材料与方法12-32
• 3 结果32-44
• 4 讨论44-47
• 5 结论47
• 6 参考文献47-52
• 附录52-53
• 致谢53-54
• 综述54-61
• 参考文献58-61

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本文编号：367752