长链非编码RNA在大鼠心肌梗死边缘区调控心肌细胞凋亡的机制研究

发布时间：2022-08-23 13:43

　　目的:心肌梗死（MI）是一种致命性疾病,每年导致全球数以百万计的死亡。心肌梗死边缘区（BZ）对于心肌梗死病人的预后至关重要。长链非编码RNA（lnc RNA）以往被认为是转录的“噪音”,且没有生物学功能。近年来,发现lnc RNA在心血管疾病中扮演重要角色。然而,lnc RNA在心肌梗死边缘区的表达和潜在功能并不清楚。我们的研究的目的是对Wistar大鼠心肌梗死的心肌梗死边缘区lnc RNA和m RNA的表达谱分析,识别出lnc RNA和m RNA在心肌梗死边缘区的差异表达。根据差异表达m RNA的生物信息学分析和共表达网络分析,预测出部分lnc RNA的潜在功能。通过实验验证,NR₀27324作为竞争性内源RNA（ce RNA）结合mi R-103-3p,进而调节下游ATG5表达,在心肌细胞低糖缺氧损伤中传递凋亡信号。研究方法:我们通过结扎冠状动脉前降支的方法,构建大鼠心肌梗死的动物模型,对照组采用假手术,即冠状动脉前降支仅穿线不结扎。术后6小时取材,利用伊文思蓝染料（EB）和氯化三苯基四氮唑（TTC）双重染色法精确定位心梗边缘区。每组取3个生物学重复,通过芯片... 

【文章页数】：81 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略语
论文一、大鼠心肌梗死边缘区长链非编码RNA和mRNA的表达谱分析
    1前言
    2 材料与方法
        2.1 主要试剂和仪器
        2.2 实验动物
        2.3 心肌梗死模型
        2.4 心肌梗死边缘区的确定
        2.5 RNA提取和RNA质量控制
        2.6 lncRNA和mRNA表达的芯片分析
        2.7 基因本体论分析(GO分析)和通路(Pathway)分析
        2.8 构建lncRNAmRNA共表达网络
        2.9 qRT-PCR验证试验
        2.10 统计学方法
    3 结果
        3.1 心肌梗死边缘区的lnc RNA和 m RNA的表达谱
        3.2 GO分析和pathway分析
        3.3 lnc RNA和 m RNA共表达网络构建
        3.4 q RT-PCR验证10 个高度差异表达的lnc RNA
    4 讨论
论文二、NR_027324 作为ce RNA与miR-103-3p结合,调节下游靶点ATG5 在心肌细胞中传递凋亡信号1
    前言
    2 材料与方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 细胞
            2.1.3 主要仪器
        2.2 NR_027324靶点预测
        2.3 293T细胞培养和转染
        2.4 H9C2心肌细胞培养、缺血模型和转染
        2.5 双荧光素酶报告基因(Luciferase)检测
        2.6 Real-time PCR检测
        2.7 Westernblot检测蛋白表达
        2.8 免疫荧光检测
        2.9 LDH检测
        2.10 MTT检测
        2.11 统计学方法
    3 结果
        3.1 NR_027324、mi R-103-3p、ATG5在低糖缺氧H9C2细胞中的变化
        3.2 NR_027324作为Ce RNA与 mi R-103-3p结合,调节miR-103-3p表达
        3.3 过表达NR_027324对低糖缺氧H9C2细胞活力的影响
        3.4 沉默NR_027324对低糖缺氧H9C2细胞活力的的影响
        3.5 沉默NR_027324抑制低糖缺氧H9C2细胞的凋亡和自噬
        3.6 N R_027324通过miR-103-3p调节ATG5表达
    4 讨论
本研究创新性的自我评价
参考文献
文献综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简介



本文编号：3677870