miR-142-5p通过直接靶向ELK1调控动脉粥样硬化内皮细胞凋亡

发布时间：2022-08-23 22:18

　　目的探讨微小RNA-142-5p（miR-142-5p）通过直接靶向包含转录激活因子ETS样蛋白（ELK）1调控动脉粥样硬化内皮细胞凋亡的作用机制。方法体外培养人主动脉内皮细胞（HAEC）,氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）刺激HAEC,采用qRT-PCR检测细胞中miR-142-5p及ELK1 mRNA的表达水平,Western印迹检测细胞中ELK1及活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（Cleaved Caspase）-3、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白（Bax）、B淋巴细胞瘤（Bcl）-2蛋白表达水平,流式细胞术检测HAECs凋亡率。双荧光素酶报告基因鉴定miR-142-5p的靶基因。细胞转染anti-miR-142-5p、anti-miR-con、pcDNA、pcDNA-ELK1,Western印迹与qRT-PCR检测miR-142-5p对靶基因ELK1的调控作用。流式细胞术检测miR-142-5p与ELK1表达变化对HAECs凋亡的作用。Western印迹检测细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达。结果 ox-LDL刺激HAECs后miR-142-5p及Cleaved... 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 细胞与主要试剂
    1.2 方法
        1.2.1 细胞培养及转染
        1.2.2 ox-LDL处理及分组
        1.2.3 实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-142-5p、ELK1 mRNA表达水平
        1.2.4 Western印迹法检测ELK1及Wnt信号通路相关蛋白表达水平
        1.2.5 流式细胞术检测细胞凋亡
        1.2.6 双荧光素酶报告实验
    1.3 统计学处理
2 结 果
    2.1 ox-LDL处理时间对HAECs凋亡、miR-142-5p和ELK1表达的影响
    2.2 anti-miR-142-5p抑制ox-LDL处理HAECs凋亡
    2.3 miR-142-5p靶向ELK1
    2.4 过表达ELK1抑制ox-LDL处理HAECs凋亡
    2.5 沉默ELK1逆转anti-miR-142-5p对ox-LDL处理HAECs抑制凋亡作用
    2.6 ELK1和miR-142-5p表达对ox-LDL处理HAECs中Wnt信号通路的影响
3 讨 论


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3678584