冷诱导RNA结合蛋白在缺氧复氧损伤中的心肌保护作用研究

发布时间：2022-09-24 19:06

　　目的: 探索H9c2心肌细胞在缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation, H/R）条件下冷诱导RNA结合蛋白（CIRP）的表达及其在心肌细胞缺氧/复氧损伤中所起的具体作用。 方法： （1）缺氧复氧的模型（95%N2和5%CO2）的建立，采用的是H9c2心肌细胞，在体外培养建成。 （2）检测CIRP在缺氧/复氧过程中，mRNA及蛋白的表达概况，采用的是RT-PCR来检测mRNA的表达，Western blot印迹法来检测蛋白的表达，并要着重注意两者在缺氧/复氧过程中表达最高的时间点，作为后续试验中缺氧复氧时间。 （3）缺氧复氧处理选择在缺氧14h及复氧2h两个时间点上进行，实验时共分为10组同时进行，分别为： ①正常对照组； ②H/R组； ③CIRPsiRNA处理细胞组； ④CIRPsiRNA处理细胞+H/R组; ⑤阴性干扰处理细胞组； ⑥阴性干扰处理细胞+H/R组； ⑦CIRP过表达质粒处理细胞组； ⑧CIRP过表达质粒处理细胞+H/R组； ⑨空载质粒处理细胞组； ⑩空载质粒处理细胞... 

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
中英缩略词表
第1章 引言
第2章 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 细胞来源
        2.1.2 主要使用仪器
        2.1.3 主要购买试剂
        2.1.4 试剂配制
    2.2 方法
        2.2.1 H9c2 心肌细胞培养
        2.2.2 H9c2 心肌细胞 H/R 模型的建立
        2.2.3 贴壁细胞转染
        2.2.4 实验分组
        2.2.5 V-FITC 法检测细胞凋亡率
        2.2.6 Western blot 操作步骤
        2.2.7 RT-PCR 操作步骤
        2.2.8 条带灰度值分析
    2.3 数据处理和统计学分析
第3章 结果
    3.1 缺氧时的结果
        3.1.1 CIRP 蛋白表达情况
        3.1.2 CIRP 的 mRNA 表达情况
        3.1.3 缺氧时细胞凋亡率的变化
    3.2 复氧时的相关结果
        3.2.1 复氧中 CIRP 的蛋白表达结果
        3.2.2 CIRP 的 mRNA 表达情况
    3.3 按预定时间缺氧复氧时的相关结果
        3.3.1 蛋白表达情况
        3.3.2 凋亡率变化
第4章 讨论
第5章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 不足之处和展望
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]初发缺血性脑卒中患者危险因素分析[J]. 靳玮,吕佩源,董艳红,王贺波,张和振,郭宗成,吕姸琨.  中国老年学杂志. 2012(20)
[2]中国心脑血管疾病死亡现况及流行趋势[J]. 张啸飞,胡大一,丁荣晶,王卉呈,颜流霞.  中华心血管病杂志. 2012 (03)
[3]重组Shh因子对海水浸泡肺微血管内皮细胞增殖和凋亡的影响研究[J]. 杨昱,钱桂生,王关嵩,邓朝霞,周长喜.  第三军医大学学报. 2009(13)

硕士论文
[1]氧化应激对乳鼠心肌细胞Sonic hedgehog表达的影响以及小鼠急性心肌梗塞模型的制备[D]. 肖青.广州医学院 2009



本文编号：3680700