冷诱导RNA结合蛋白在缺氧复氧损伤中的心肌保护作用研究
发布时间:2022-09-24 19:06
目的: 探索H9c2心肌细胞在缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation, H/R)条件下冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)的表达及其在心肌细胞缺氧/复氧损伤中所起的具体作用。 方法: (1)缺氧复氧的模型(95%N2和5%CO2)的建立,采用的是H9c2心肌细胞,在体外培养建成。 (2)检测CIRP在缺氧/复氧过程中,mRNA及蛋白的表达概况,采用的是RT-PCR来检测mRNA的表达,Western blot印迹法来检测蛋白的表达,并要着重注意两者在缺氧/复氧过程中表达最高的时间点,作为后续试验中缺氧复氧时间。 (3)缺氧复氧处理选择在缺氧14h及复氧2h两个时间点上进行,实验时共分为10组同时进行,分别为: ①正常对照组; ②H/R组; ③CIRPsiRNA处理细胞组; ④CIRPsiRNA处理细胞+H/R组; ⑤阴性干扰处理细胞组; ⑥阴性干扰处理细胞+H/R组; ⑦CIRP过表达质粒处理细胞组; ⑧CIRP过表达质粒处理细胞+H/R组; ⑨空载质粒处理细胞组; ⑩空载质粒处理细胞...
【文章页数】:53 页
【学位级别】:硕士
【文章目录】:
摘要
ABSTRACT
中英缩略词表
第1章 引言
第2章 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 细胞来源
2.1.2 主要使用仪器
2.1.3 主要购买试剂
2.1.4 试剂配制
2.2 方法
2.2.1 H9c2 心肌细胞培养
2.2.2 H9c2 心肌细胞 H/R 模型的建立
2.2.3 贴壁细胞转染
2.2.4 实验分组
2.2.5 V-FITC 法检测细胞凋亡率
2.2.6 Western blot 操作步骤
2.2.7 RT-PCR 操作步骤
2.2.8 条带灰度值分析
2.3 数据处理和统计学分析
第3章 结果
3.1 缺氧时的结果
3.1.1 CIRP 蛋白表达情况
3.1.2 CIRP 的 mRNA 表达情况
3.1.3 缺氧时细胞凋亡率的变化
3.2 复氧时的相关结果
3.2.1 复氧中 CIRP 的蛋白表达结果
3.2.2 CIRP 的 mRNA 表达情况
3.3 按预定时间缺氧复氧时的相关结果
3.3.1 蛋白表达情况
3.3.2 凋亡率变化
第4章 讨论
第5章 结论与展望
5.1 结论
5.2 不足之处和展望
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
参考文献
【参考文献】:
期刊论文
[1]初发缺血性脑卒中患者危险因素分析[J]. 靳玮,吕佩源,董艳红,王贺波,张和振,郭宗成,吕姸琨. 中国老年学杂志. 2012(20)
[2]中国心脑血管疾病死亡现况及流行趋势[J]. 张啸飞,胡大一,丁荣晶,王卉呈,颜流霞. 中华心血管病杂志. 2012 (03)
[3]重组Shh因子对海水浸泡肺微血管内皮细胞增殖和凋亡的影响研究[J]. 杨昱,钱桂生,王关嵩,邓朝霞,周长喜. 第三军医大学学报. 2009(13)
硕士论文
[1]氧化应激对乳鼠心肌细胞Sonic hedgehog表达的影响以及小鼠急性心肌梗塞模型的制备[D]. 肖青.广州医学院 2009
本文编号:3680700
【文章页数】:53 页
【学位级别】:硕士
【文章目录】:
摘要
ABSTRACT
中英缩略词表
第1章 引言
第2章 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 细胞来源
2.1.2 主要使用仪器
2.1.3 主要购买试剂
2.1.4 试剂配制
2.2 方法
2.2.1 H9c2 心肌细胞培养
2.2.2 H9c2 心肌细胞 H/R 模型的建立
2.2.3 贴壁细胞转染
2.2.4 实验分组
2.2.5 V-FITC 法检测细胞凋亡率
2.2.6 Western blot 操作步骤
2.2.7 RT-PCR 操作步骤
2.2.8 条带灰度值分析
2.3 数据处理和统计学分析
第3章 结果
3.1 缺氧时的结果
3.1.1 CIRP 蛋白表达情况
3.1.2 CIRP 的 mRNA 表达情况
3.1.3 缺氧时细胞凋亡率的变化
3.2 复氧时的相关结果
3.2.1 复氧中 CIRP 的蛋白表达结果
3.2.2 CIRP 的 mRNA 表达情况
3.3 按预定时间缺氧复氧时的相关结果
3.3.1 蛋白表达情况
3.3.2 凋亡率变化
第4章 讨论
第5章 结论与展望
5.1 结论
5.2 不足之处和展望
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
参考文献
【参考文献】:
期刊论文
[1]初发缺血性脑卒中患者危险因素分析[J]. 靳玮,吕佩源,董艳红,王贺波,张和振,郭宗成,吕姸琨. 中国老年学杂志. 2012(20)
[2]中国心脑血管疾病死亡现况及流行趋势[J]. 张啸飞,胡大一,丁荣晶,王卉呈,颜流霞. 中华心血管病杂志. 2012 (03)
[3]重组Shh因子对海水浸泡肺微血管内皮细胞增殖和凋亡的影响研究[J]. 杨昱,钱桂生,王关嵩,邓朝霞,周长喜. 第三军医大学学报. 2009(13)
硕士论文
[1]氧化应激对乳鼠心肌细胞Sonic hedgehog表达的影响以及小鼠急性心肌梗塞模型的制备[D]. 肖青.广州医学院 2009
本文编号:3680700
本文链接:https://www.wllwen.com/yixuelunwen/xxg/3680700.html
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