CD137-CD137L信号通过调控巨噬细胞MMP-9影响小鼠血管钙化形成

发布时间：2022-10-06 00:08

　　目的研究CD137-CD137L信号是否通过介导巨噬细胞基质金属蛋白酶9（MMP-9）的生成和活性,从而影响血管平滑肌细胞（VSMC）和动脉粥样硬化钙化的形成。方法1.体外实验:采用巯基乙酸盐腹腔灌洗提取C57BL/6J小鼠腹腔巨噬细胞（PM）。采用组织块贴壁法进行小鼠胸主动脉VSMC原代培养。构建PM-VSMC共培养体系进行下一步实验。实验分成5组:（1）对照组（单独培养VSMC）;（2）共培养组（PM-VSMC共培养）;（3）CD137L激动对照组（对照组+激动CD137-CD137L信号）;（4）CD137L激动共培养组（共培养组+激动CD137-CD137L信号）;（5）MMP-9抑制组（共培养抑制MMP-9+激动CD137-CD137L信号）。采用明胶酶谱法检测MMP-9蛋白的活性。RT-PCR和Western blot分别检测各组钙化相关蛋白OPN、Runx-2的m RNA和蛋白表达水平。微量比色法测定各组钙离子浓度及碱性磷酸酶（ALP）活性。Von Kossa和茜素红染色观察各组细胞钙盐沉积程度。2.体内实验:取6~8周龄Apo E-/-小鼠30只,随机分为5组:（1）即... 

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【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
常用缩略词对照表
第一章 绪论
    1.1 研究背景
    1.2 研究目的
    1.3 研究内容和技术路线
        1.3.1 研究内容
        1.3.2 技术路线
    1.4 研究意义
第二章 CD137-CD137L信号诱导巨噬细胞MMP-9 生成
    2.1 材料
        2.1.1 主要仪器
        2.1.2 主要试剂及耗材
        2.1.3 主要溶液及成分
        2.1.4 手术器械
        2.1.5 实验动物
    2.2 实验方法
        2.2.1 小鼠原代PM提取
        2.2.2 小鼠原代VSMC提取
        2.2.3 细胞培养及实验干预
        2.2.4 细胞总蛋白的提取和浓度鉴定
        2.2.5 Western blot蛋白印迹
        2.2.6 明胶酶谱法
        2.2.7 细胞免疫荧光
        2.2.8 流式细胞术检测细胞表面蛋白
        2.2.9 统计学方法
    2.3 结果
        2.3.1 小鼠原代PM提取纯度及形态鉴定
        2.3.2 CD137-CD137L信号对PM中 MMP-9 蛋白表达的影响
    2.4 讨论
第三章 巨噬细胞MMP-9在CD137-CD137L信号调控的血管钙化中的作用
    3.1 材料
        3.1.1 主要试剂及溶液成分
        3.1.2 实验动物
    3.2 实验方法
        3.2.1 实验分组
        3.2.2 RT-PCR检测目的基因mRNA的表达水平
        3.2.3 钙离子含量微量比色法测定
        3.2.4 ALP 活性微量比色法检测
        3.2.5 Von Kossa 染色
        3.2.6 茜素红染色
        3.2.7 建立ApoE~(-/-)小鼠AS模型及分组处理
        3.2.8 免疫组化染色
        3.2.9 统计学方法
    3.3 结果
        3.3.1 抑制巨噬细胞MMP-9 减少CD137-CD137L信号诱导的VSMC钙 化相关蛋白的表达
        3.3.2 抑制巨噬细胞MMP-9 降低CD137-CD137L信号诱导的VSMC离子浓度和ALP活性
        3.3.3 抑制巨噬细胞MMP-9 减轻CD137-CD137L信号诱导的VSMC化程度
        3.3.4 抑制巨噬细胞MMP-9 减轻CD137-CD137L信号诱导的ApoE-/-鼠主动脉斑块及钙化形成
    3.4 讨论
第四章 结论
参考文献
第五章 综述
    参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的学术论文



本文编号：3686759