IQGAP1-N-WASP信号通路在肺炎衣原体感染促进血管内皮细胞迁移及血管新生中的调控作用

发布时间：2022-11-06 12:58

　　目的:利用肺炎衣原体（Chlamdia pneumoniae,C.pneumoniae）体外感染血管内皮细胞（vascular endothelial cell,VEC）模型,观察 C.pneumoniae 感染对 VEC 迁移和血管新生的影响;探讨IQGAP1-N-WASP信号通路在C.pneumoniae感染诱导VEC迁移和血管新生中的作用。方法:1.C.pneumoniae增殖培养后体外感染VEC;2.采用Western blot技术检测C.pneumoniae感染的VEC内IQGAP1蛋白的表达水平;3.免疫共沉淀法检测C.pneumoniae感染后IQGAP1的磷酸化水平;4.CCK-8 检测 Src抑制剂 PP2 以及 PKC 抑制剂 GF 109203X 和 chelerythrine 在使用浓度及作用时间内对VEC活力的影响;5.免疫荧光法确定PP2、GF109203X以及chelerythrine在使用浓度及作用时间内对C.pneumoniae感染率的影响;6.分别用PP2、GF 109203X和chelerythrine预处理后,免疫共沉淀法检测C.pneumoni... 

【文章页数】：124 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
缩略语
前言
    研究现状、成果
    研究目的、方法
一、C.pneumoniae感染对IQGAP1活性的影响
    实验一 C.pneumoniae感染对IQGAP1活性的影响
        1.1 实验材料
            1.1.1 细胞
            1.1.2 菌株
            1.1.3 主要试剂
            1.1.4 主要仪器
            1.1.5 主要试剂的配制
        1.2 实验方法
            1.2.1 VEC的培养、复苏、传代与冻存
            1.2.2 C.pneumoniae的增殖培养
            1.2.3 C.pneumoniae感染VEC
            1.2.4 Western blot分析C.pneumoniae感染后VEC IQGAP1内表达水平
            1.2.5 免疫共沉淀分析C.pneumoniae感染后VEC IQGAP1的磷酸化水平
            1.2.6. 统计学处理
        1.3 结果
            1.3.1. C.pneumoniae感染对VEC IQGAP1蛋白表达水平的影响
            1.3.2. C.pneumoniae感染可诱导VEC IQGAP1酪氨酸磷酸化
            1.3.3. C.pneumoniae感染促进VEC IQGAP1丝氨酸磷酸化
    实验二 Src、PKC在C.pneumoniae感染激活IQGAP1中的作用
        2.1 实验材料
            2.1.1. 细胞
            2.1.2 菌株
            2.1.3 主要试剂
            2.1.4 主要仪器
            2.1.5 主要试剂的配制
        2.2 实验方法
            2.2.1. C.pneumoniae感染VEC
            2.2.2. CCK-8检测PP2、GF 109203X和chelerythrine对VEC活力的影响
            2.2.3. 免疫共沉淀法检测PP2对C.pneumoniae感染诱导的VEC IQGAP1酪氨酸磷酸化的影响
            2.2.4. 免疫共沉淀法检测GF 109203X和chelerythrine对C.pneumoniae感染诱导VEC IQGAP1丝氨酸磷酸化的影响
            2.2.5. 统计学处理
        2.3 结果
            2.3.1. PP2、GF 109203X和chelerythrine对VEC活力的影响
            2.3.2. PP2可抑制C.pneumoniae感染诱导的IQGAP1酪氨酸磷酸化
            2.3.3. GF 109203X和chelerythrine均可抑制C.pneumoniae感染诱导的VEC IQGAP1丝氨酸磷酸化
二、IQGAP1在C.pneunioniae感染诱导的VEC迁移和血管新生中的作用
    1. 实验材料
        1.1. 细胞
        1 2. 菌株
        1.3. 主要试剂
        1.4. 主要仪器
        1.5. 主要试剂的配制
    2. 实验方法
        2.1. C.pneumoniae感染VEC
        2.2. RNA干扰
        2.3 免疫荧光法观察PP2、GF 109203X以及chelerythrine对C.pneumoniae感染率的影响
        2.4. 实验分组
        2.5. Wound healing实验
        2.6. Transwell实验
        2.7. 微管腔形成实验
        2.8. 肌动蛋白聚合实验
        2.9. 免疫荧光双标染色
        2.10. 统计学处理
    3. 结果
        3.1. RNA干扰效能达到实验标准
        3.2. 免疫荧光法确定PP2、GF 109203X以及chelerythrine对C.pneumoniae感染率的影响
        3.3. Wound healing实验观察IQGAP1在C.pneumoniae感染诱导的VEC迁移中的作用
        3.4. Transwell实验观察IQGAP1在C.pneumoniae感染诱导的VEC迁移中的作用
        3.5. 微管腔形成实验观察IQGAP1在C.pneumoniae感染诱导的VEC血管新生中的作用
        3.6. 激光扫描共聚焦显微镜观察C.pneumoniae感染对VEC肌动蛋白聚合的影响
        3.7. 免疫荧光双标染色法观察C.pneumoniae感染VEC后IQGAP1和肌丝的共定位
三、IQGAP1通过N-WASP调控C.pneumoniae感染诱导的VEC迁移和血管新生
    1. 实验材料
        1.1. 细胞
        1.2. 菌株
        1.3. 主要试剂
        1.4. 主要仪器
        1.5. 主要试剂的配制
    2. 实验方法
        2.1. C.pneumoniae感染VEC
        2.2. 实验分组
        2.3. 免疫共沉淀观察IQGAP1与N-WASP之间的相互作用
        2.4. 共聚焦显微镜观察IQGAP1对C.pneumoniae感染诱导VEC肌动蛋白和N-WASP共定位的影响
        2.5. Western blot检测IQGAP1对C.pneumoniae感染诱导的N-WASP磷酸化水平的影响
        2.6. 统计学处理
    3. 结果
        3.1. IQGAP1与N-WASP之间的相互作用
        3.2. IQGAP1对C.pneumoniae感染诱导VEC肌丝和N-WASP共定位的影响
        3.3. IQGAP1对C.pneumoniae感染诱导的VEC N-WASP磷酸化的影响
讨论
小结
结论
论文创新点
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
附录
综述 IQGAP1在动脉粥样硬化发生发展中的作用研究进展
    综述参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]肺炎衣原体感染通过PI3K通路诱导血管内皮细胞迁移[J]. 权伟,张利军,陈宁,沈炳玲,叶静,王蓓蓓,刘欣,张丽莙.  中国病理生理杂志. 2010(07)
[2]Atherosclerosis,inflammation and Chlamydia pneumoniae[J]. Giovanni Fazio,Maria Giovino,Alessandro Gullotti,Daniela Bacarella,Giuseppina Novo,Salvatore Novo.  World Journal of Cardiology. 2009(01)
[3]黄连素通过PI3K抑制肺炎衣原体感染诱导的血管内皮细胞迁移[J]. 权伟,张利军,陈宁,王蓓蓓,张丽莙.  中国动脉硬化杂志. 2009(11)

硕士论文
[1]肺炎衣原体感染通过激活Racl诱导血管平滑肌细胞迁移[D]. 张俊霞.天津医科大学 2013



本文编号：3703543