miRNA-30a通过介导Th17细胞分化影响免疫性血小板减少性紫癜发病的初步探讨

发布时间：2023-02-27 08:23

　　目的:探讨miRNA-30a是否通过影响Th17细胞分化参与ITP发病;通过对miRNA-30a预测靶基因SOCS3的验证,进一步探讨miRNA-30a参与ITP发病的可能机制。方法:建立慢性ITP小鼠模型,检测其脾脏单个核细胞中miRNA-30a、 RoRγt的表达并分析两者相关性;构建含靶基因mRNA 3′UTR的荧光素酶表达载体及含有miRNA的绿色荧光载体,通过Luciferase荧光检测、实时荧光定量PCR(qPCR)、Western blot验证SOCS3是否为miRNA-30a的靶基因。结果:实验组小鼠血小板计数在注射抗小鼠血小板血清(APS)48 h后下降至正常的20%,且至少可维持14 d。实验组小鼠脾脏单个核细胞中miRNA-30a及RoRγt表达较对照组升高(P<0.05),且两者存在正性相关(r=0.54)。pMDH-GFP-miRNA-30a与pMIR-report-UTR实验组的荧光素酶的活性明显低于pMDH-GFP空质粒与pMIR-report-UTR的对照组(P <0.05)。转染miRNA-30a质粒的EL4细胞中SOCS3在mRNA及蛋白...

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【文章目录】：
材料和方法
    实验动物
    试剂与仪器
    慢性ITP小鼠模型构建
    小鼠脾脏单个核细胞制备
    293T细胞培养
    双荧光素酶报告基因实验
    脂质体转染
    慢病毒制备
    EL4细胞的慢病毒转染
    统计学分析
结果
    慢性ITP小鼠模型建立
    实验组与对照组小鼠脾脏单个核细胞中miRNA-30a及RORγt的表达
    miRNA-30a与RORγt表达的相关性分析
    miRNA-30a表达质粒（PMDH-GFP-miRNA-30a）及miRNA-30a报告质粒（pMIR-report-UTR）构建及验证
    慢病毒转染EL4细胞实验
    靶基因验证
讨论



本文编号：3751001