两种心肌损伤标志物的免疫活性浓度准确定量方法研究
发布时间：2023-04-07 22:12
心血管疾病是我国临床上的常见病,极易发展为危重病。心血管疾病的早期诊断需要结合临床症状,心电图,心肌损伤标志物检测等方面进行判断。标志物检测是临床非入侵性诊断的重要方法之一。肌红蛋白和转铁蛋白分别是目前心肌损伤患者早期诊断标志物和急性时相反应标志物,hMYO和hTRF的准确定量有助于心血管疾病病人的早期诊断和病程判断。临床上蛋白质标志物一般采用免疫分析的方法进行定量,因此相比蛋白质的质量浓度或摩尔浓度,其免疫活性浓度成为保障检测结果准确可比的关键,而从源头上建立一种准确的蛋白质免疫活性浓度绝对定量方法成为建立蛋白质免疫活性浓度精准“标尺”的核心。近年来发展起来的基于分子相互作用的无标浓度分析方法(Calibration Free Concentration Analysis,CFCA)能够满足蛋白质免疫活性浓度直接准确定量的目的,该方法基于特定单克隆抗体与蛋白质的相互作用而无需外部标准品即可准确测定能够与抗体结合的抗原浓度。本文通过研究肌红蛋白和转铁蛋白两种心肌标志物的免疫活性浓度准确定量方法,对于保证心肌诊断标志物检测结果准确可比、指导心肌损伤的早期诊断和后续治疗具有重要意义。首先,...
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
学位论文数据集
摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
1.1 心肌损伤标志物
1.1.1 心肌损伤标志物及其应用
1.1.2 肌红蛋白及其检测方法
1.1.3 人转铁蛋白及其检测方法
1.2 蛋白定量方法的现状
1.2.1 非免疫学分析方法
1.2.1.1 液相色谱法
1.2.1.2 液相色谱质谱法(LC-MS)
1.2.1.3 同位素稀释质谱法(IDMS)
1.2.1.4 毛细管电泳法
1.2.2 免疫学方法
1.2.2.1 酶联免疫检测法(ELISA)
1.2.2.2 免疫荧光法
1.2.2.3 免疫胶体金法
1.2.2.4 Western blot法
1.3 表面等离子体共振技术(SPR)
1.3.1 表面等离子体共振技术光学原理
1.3.2 表面等离子体共振技术定量原理
1.3.2.1 无标定量法
1.3.3 表面等离子体共振技术的应用
1.3.3.1 表面等离子共振技术在生物医学领域的应用
1.3.3.2 表面等离子共振技术在食品检测领域的应用
1.3.3.3 表面等离子共振技术在环境化工领域的应用
1.3.3.4 表面等离子共振技术与其他技术的联用
1.4 课题提出
第二章 基于SPR的人心肌红蛋白免疫活性浓度绝对测定方法研究
2.1 试剂与仪器
2.1.1 试剂
2.1.2 仪器
2.2 实验部分
2.2.1 纯度测定
2.2.2 圆二色谱鉴定蛋白质二级结构
2.2.3 蛋白质鉴定
2.2.4 肌红蛋白分子量测定及扩散系数计算
2.2.5 肌红蛋白总蛋白定量
2.2.6 无标定量法测定肌红蛋白含量
2.2.6.1 定量原理
2.2.6.2 抗体偶联
2.2.6.3 芯片再生溶液筛选
2.2.6.4 肌红蛋白样品的制备
2.2.6.5 肌红蛋白的无标定量分析
2.2.6.6 动力学研究
2.3 结果与讨论
2.3.1 凝胶排阻色谱纯度结果
2.3.2 圆二色谱检测二级结构
2.3.3 蛋白质鉴定结果
2.3.4 MALDI-TOF分子量测定结果及扩散系数
2.3.5 肌红蛋白IDMS测定结果
2.3.6 无标定量法测定肌红蛋白含量
2.3.6.1 抗体稀释液pH筛选结果
2.3.6.2 芯片再生溶液筛选结果
2.3.6.3 CFCA预试验
2.3.6.3 抗体偶联水平优化
2.3.6.4 CFCA法测定结果
2.3.6.5 重复性和再现性
2.3.6.6 动力学考察
2.4 结论
第三章 基于SPR的人血清中转铁蛋白免疫活性浓度绝对测定方法研究
3.1 试剂与仪器
3.1.1 试剂
3.1.2 仪器
3.2 实验部分
3.2.1 转铁蛋白分子量测定及扩散系数计算
3.2.2 抗体偶联pH筛选
3.2.3 抗体偶联浓度及芯片偶联
3.2.4 再生溶液筛选
3.2.5 人血清中转铁蛋白样品的制备
3.2.6 人血清中转铁蛋白样品的无标定量分析
3.2.7 纯品转铁蛋白样品的无标定量分析
3.3 结果与讨论
3.3.1 MALDI-TOF分子量测定结果及扩散系数
3.3.2 人血清中转铁蛋白生化分析仪测定结果
3.3.3 抗体稀释液pH筛选结果
3.3.4 抗体稀释浓度筛选结果及芯片偶联
3.3.5 芯片再生溶液筛选结果
3.3.6 人血清中转铁蛋白定量预试验
3.3.7 人血清中转铁蛋白样品的无标定量分析
3.3.8 纯品转铁蛋白样品的无标定量分析
3.4 结论
第四章 结论
参考文献
致谢
研究成果及发表的学术论文
作者和导师简介
附件
本文编号：3785423
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
学位论文数据集
摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
1.1 心肌损伤标志物
1.1.1 心肌损伤标志物及其应用
1.1.2 肌红蛋白及其检测方法
1.1.3 人转铁蛋白及其检测方法
1.2 蛋白定量方法的现状
1.2.1 非免疫学分析方法
1.2.1.1 液相色谱法
1.2.1.2 液相色谱质谱法(LC-MS)
1.2.1.3 同位素稀释质谱法(IDMS)
1.2.1.4 毛细管电泳法
1.2.2 免疫学方法
1.2.2.1 酶联免疫检测法(ELISA)
1.2.2.2 免疫荧光法
1.2.2.3 免疫胶体金法
1.2.2.4 Western blot法
1.3 表面等离子体共振技术(SPR)
1.3.1 表面等离子体共振技术光学原理
1.3.2 表面等离子体共振技术定量原理
1.3.2.1 无标定量法
1.3.3 表面等离子体共振技术的应用
1.3.3.1 表面等离子共振技术在生物医学领域的应用
1.3.3.2 表面等离子共振技术在食品检测领域的应用
1.3.3.3 表面等离子共振技术在环境化工领域的应用
1.3.3.4 表面等离子共振技术与其他技术的联用
1.4 课题提出
第二章 基于SPR的人心肌红蛋白免疫活性浓度绝对测定方法研究
2.1 试剂与仪器
2.1.1 试剂
2.1.2 仪器
2.2 实验部分
2.2.1 纯度测定
2.2.2 圆二色谱鉴定蛋白质二级结构
2.2.3 蛋白质鉴定
2.2.4 肌红蛋白分子量测定及扩散系数计算
2.2.5 肌红蛋白总蛋白定量
2.2.6 无标定量法测定肌红蛋白含量
2.2.6.1 定量原理
2.2.6.2 抗体偶联
2.2.6.3 芯片再生溶液筛选
2.2.6.4 肌红蛋白样品的制备
2.2.6.5 肌红蛋白的无标定量分析
2.2.6.6 动力学研究
2.3 结果与讨论
2.3.1 凝胶排阻色谱纯度结果
2.3.2 圆二色谱检测二级结构
2.3.3 蛋白质鉴定结果
2.3.4 MALDI-TOF分子量测定结果及扩散系数
2.3.5 肌红蛋白IDMS测定结果
2.3.6 无标定量法测定肌红蛋白含量
2.3.6.1 抗体稀释液pH筛选结果
2.3.6.2 芯片再生溶液筛选结果
2.3.6.3 CFCA预试验
2.3.6.3 抗体偶联水平优化
2.3.6.4 CFCA法测定结果
2.3.6.5 重复性和再现性
2.3.6.6 动力学考察
2.4 结论
第三章 基于SPR的人血清中转铁蛋白免疫活性浓度绝对测定方法研究
3.1 试剂与仪器
3.1.1 试剂
3.1.2 仪器
3.2 实验部分
3.2.1 转铁蛋白分子量测定及扩散系数计算
3.2.2 抗体偶联pH筛选
3.2.3 抗体偶联浓度及芯片偶联
3.2.4 再生溶液筛选
3.2.5 人血清中转铁蛋白样品的制备
3.2.6 人血清中转铁蛋白样品的无标定量分析
3.2.7 纯品转铁蛋白样品的无标定量分析
3.3 结果与讨论
3.3.1 MALDI-TOF分子量测定结果及扩散系数
3.3.2 人血清中转铁蛋白生化分析仪测定结果
3.3.3 抗体稀释液pH筛选结果
3.3.4 抗体稀释浓度筛选结果及芯片偶联
3.3.5 芯片再生溶液筛选结果
3.3.6 人血清中转铁蛋白定量预试验
3.3.7 人血清中转铁蛋白样品的无标定量分析
3.3.8 纯品转铁蛋白样品的无标定量分析
3.4 结论
第四章 结论
参考文献
致谢
研究成果及发表的学术论文
作者和导师简介
附件
本文编号：3785423
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