MiR-377调节甘油三酯代谢与动脉粥样硬化的作用及机制
发布时间：2023-05-08 00:27
[背景与目的]:动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是冠心病、心肌梗死和脑梗死等心脑血管疾病的共同病理学基础,其中脂质代谢紊乱是AS发生发展的重要危险因素,严重危害人类健康。新近流行病学调查证实甘油三酯(triglycerides,TG)是AS的独立危险因素,其引发的高甘油三酯血症能促进AS发生发展。近年来,国内外大量研究表明micro RNAs在脂质代谢和AS发生发展过程中发挥重要作用。本课题组先前研究证实mi R-186、mi R-134、mi R-467b等多种micro RNAs参与巨噬细胞内脂质蓄积和炎症反应。MiR-377作为一个多功能的micro RNA,它参与炎症、氧化应激和血管生成,并与心肌再生关系密切。更为重要的是,有研究报道mi R-377与体内脂质水平具有一定相关性,这表明循环mi R-377可能在调节体内脂质代谢过程中扮演重要角色。并且,目前尚无相关研究报道mi R-377在AS发生发展过程中的作用。DNA甲基化转移酶1(DNA methyltransferases 1,DNMT1)属于DNMTs家族。作为最重要的DNA甲基转移酶,DNMT1在...
【文章页数】：98 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
主要缩略语中英文索引
第1章 绪论
第2章 实验材料
2.1 主要实验试剂
2.2 MICRORNA公共数据库及在线软件
2.3 主要实验器材与实验仪器
第3章 实验方法
3.1 收集整理临床资料
3.1.1 统计患者信息
3.1.2 采集血液标本
3.2 实时定量PCR(REALTIME-QUANTITATIVEPCR,RT-QPCR)
3.3 生物信息学预测
3.3.1 MIR-377序列、基因定位及保守性
3.3.2 MicroRNA靶基因预测
3.3.3 MicroRNA.org网站预测
3.3.4 MiR-377与DNMT13’-UTR结合自由能
3.3.5 GPIHBP1启动子区域序列
3.3.6 GPIHBP1启动子区域甲基化情况
3.4 细胞培养
3.5 细胞蛋白抽提
3.6 BCA蛋白定量
3.7 蛋白质印迹检测(WESTERNBLOT)
3.8 双荧光素酶报告基因构建与分析
3.9 DNMT1活性检测
3.10 亚硫酸盐测序
3.11 LPL与GPIHBP1结合试验
3.12 APOE-/-小鼠的饲养与动物模型的构建
3.13 动物组织取材
3.14 小鼠主动脉内皮细胞提取
3.15 HE染色
3.16 油红O染色
3.17 MASSON染色
3.18 统计分析
第4章 实验结果
4.1 CHD患者血清中各种MICRORNAS表达情况
4.1.1 临床患者分组
4.1.2 CHD合并高脂血症患者血清中MICRORNAS表达水平
4.1.3 CHD合并高甘油三酯血症患者血清中MIR-145、MIR-377和MIR-410表达水平
4.2 生物信息学预测MIR-377与DNMT1特异性结合
4.2.1 不同物种间MIR-377序列高度保守
4.2.2 MIR-377能与DNMT13’-UTR特异性结合
4.2.3 MIR-377与GPIHBP1、LPL无特异性结合作用
4.3 荧光素酶报告基因检测MIR-377与DNMT1特异性结合
4.3.1 MIR-377与DNMT1特异性结合
4.3.2 MIR-377不能和GPIHBP1、LPL特异性结合
4.4 MIR-377抑制细胞内DNMT1的表达和活性
4.4.1 MIR-377抑制细胞内DNMT1活性
4.4.2 MIR-377呈现浓度依赖性抑制DNMT1表达
4.4.3 MIR-377呈现时间依赖性抑制DNMT1表达
4.5 DNMT1促进GPIHBP1启动子DNA甲基化而抑制其表达
4.5.1 生物信息学预测GPIHBP1启动子区域CPG岛序列
4.5.2 DNMT1促进GPIHBP1启动子DNA甲基化
4.5.3 DNMT1抑制GPIHBP1表达
4.6 MIR-377上调GPIHBP1表达并增加其与LPL结合量
4.6.1 MIR-377抑制DNMT1降低GPIHBP1启动子甲基化水平
4.6.2 MIR-377抑制DNMT1上调GPIHBP1表达
4.6.3 MIR-377抑制DNMT1增加GPIHBP1与LPL结合量
4.7 MIR-377降低APOE-/-小鼠血浆甘油三酯水平
4.7.1 MIR-377降低主动脉内皮细胞中DNMT1表达及活性
4.7.2 MIR-377升高主动脉内皮细胞中GPIHBP1表达
4.7.3 MIR-377增加主动脉内皮细胞表面GPIHBP1与LPL结合量
4.7.4 MIR-377降低APOE-/-小鼠血浆TG水平
4.8 MIR-377抑制APOE-/-小鼠AS斑块形成
4.8.1 MIR-377减少APOE-/-小鼠主动脉弓处斑块面积
4.8.2 MIR-377减少APOE-/-小鼠主动脉血管壁内脂质蓄积
4.8.3 MIR-377减少APOE-/-小鼠主动脉瓣膜处AS斑块形成
第5章 讨论
第6章 结论
参考文献
文献综述
参考文献
攻读学位期间发表论文
致谢
附件
本文编号：3811624
【文章页数】：98 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
主要缩略语中英文索引
第1章 绪论
第2章 实验材料
2.1 主要实验试剂
2.2 MICRORNA公共数据库及在线软件
2.3 主要实验器材与实验仪器
第3章 实验方法
3.1 收集整理临床资料
3.1.1 统计患者信息
3.1.2 采集血液标本
3.2 实时定量PCR(REALTIME-QUANTITATIVEPCR,RT-QPCR)
3.3 生物信息学预测
3.3.1 MIR-377序列、基因定位及保守性
3.3.2 MicroRNA靶基因预测
3.3.3 MicroRNA.org网站预测
3.3.4 MiR-377与DNMT13’-UTR结合自由能
3.3.5 GPIHBP1启动子区域序列
3.3.6 GPIHBP1启动子区域甲基化情况
3.4 细胞培养
3.5 细胞蛋白抽提
3.6 BCA蛋白定量
3.7 蛋白质印迹检测(WESTERNBLOT)
3.8 双荧光素酶报告基因构建与分析
3.9 DNMT1活性检测
3.10 亚硫酸盐测序
3.11 LPL与GPIHBP1结合试验
3.12 APOE-/-小鼠的饲养与动物模型的构建
3.13 动物组织取材
3.14 小鼠主动脉内皮细胞提取
3.15 HE染色
3.16 油红O染色
3.17 MASSON染色
3.18 统计分析
第4章 实验结果
4.1 CHD患者血清中各种MICRORNAS表达情况
4.1.1 临床患者分组
4.1.2 CHD合并高脂血症患者血清中MICRORNAS表达水平
4.1.3 CHD合并高甘油三酯血症患者血清中MIR-145、MIR-377和MIR-410表达水平
4.2 生物信息学预测MIR-377与DNMT1特异性结合
4.2.1 不同物种间MIR-377序列高度保守
4.2.2 MIR-377能与DNMT13’-UTR特异性结合
4.2.3 MIR-377与GPIHBP1、LPL无特异性结合作用
4.3 荧光素酶报告基因检测MIR-377与DNMT1特异性结合
4.3.1 MIR-377与DNMT1特异性结合
4.3.2 MIR-377不能和GPIHBP1、LPL特异性结合
4.4 MIR-377抑制细胞内DNMT1的表达和活性
4.4.1 MIR-377抑制细胞内DNMT1活性
4.4.2 MIR-377呈现浓度依赖性抑制DNMT1表达
4.4.3 MIR-377呈现时间依赖性抑制DNMT1表达
4.5 DNMT1促进GPIHBP1启动子DNA甲基化而抑制其表达
4.5.1 生物信息学预测GPIHBP1启动子区域CPG岛序列
4.5.2 DNMT1促进GPIHBP1启动子DNA甲基化
4.5.3 DNMT1抑制GPIHBP1表达
4.6 MIR-377上调GPIHBP1表达并增加其与LPL结合量
4.6.1 MIR-377抑制DNMT1降低GPIHBP1启动子甲基化水平
4.6.2 MIR-377抑制DNMT1上调GPIHBP1表达
4.6.3 MIR-377抑制DNMT1增加GPIHBP1与LPL结合量
4.7 MIR-377降低APOE-/-小鼠血浆甘油三酯水平
4.7.1 MIR-377降低主动脉内皮细胞中DNMT1表达及活性
4.7.2 MIR-377升高主动脉内皮细胞中GPIHBP1表达
4.7.3 MIR-377增加主动脉内皮细胞表面GPIHBP1与LPL结合量
4.7.4 MIR-377降低APOE-/-小鼠血浆TG水平
4.8 MIR-377抑制APOE-/-小鼠AS斑块形成
4.8.1 MIR-377减少APOE-/-小鼠主动脉弓处斑块面积
4.8.2 MIR-377减少APOE-/-小鼠主动脉血管壁内脂质蓄积
4.8.3 MIR-377减少APOE-/-小鼠主动脉瓣膜处AS斑块形成
第5章 讨论
第6章 结论
参考文献
文献综述
参考文献
攻读学位期间发表论文
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