锌转运蛋白Zip2（SLC39A2）在心肌缺血/再灌注损伤中的作用

发布时间：2023-05-22 04:21

　　目的1.观察再灌注期心肌Zip2的表达是否增加,并探讨再灌注时Zip2表达上调是否因锌含量减少所引起。2.阐明Zip2在心肌缺血/再灌注损伤中的作用。3.探讨再灌注时锌离子的丢失是否通过激活STAT3来增加Zip2的表达。方法建立小鼠在体心脏缺血/再灌注模型和H9c2细胞缺氧/复氧模型;用电感耦合离子发射光谱仪(ICPOES)测量心脏组织的锌含量;用实时定量PCR技术(RT-PCR)检测心肌组织中Zip2 mRNA表达水平;用Western blotting法检测心肌组织与H9c2细胞中Zip2、p-STAT3(Tyr705)、STAT3及Tubulin的蛋白表达;利用CCK-8法检测H9c2细胞活性;利用LDH、cTn I、CK-MB ELISA试剂盒检测小鼠血清中酶的活性;用Evans Blue和TTC双染色法检测心肌梗死面积大小。结果1.ICPOES实验结果显示,再灌注时心肌锌离子含量减少,说明再灌注引起锌离子丢失。2.RT-PCR和Western blotting实验结果显示,再灌注时Zip2的mRNA和蛋白表达均增加,而再灌注初期给予ZnCl₂能够抑制Z...

【文章页数】：122 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
缩略语
前言
    研究现状、成果
    研究目的、方法
一、探究锌转运体Zip2在心肌缺血/再灌注损伤中的作用
    1.1 材料和方法
        1.1.1 实验动物
        1.1.2 实验仪器
        1.1.3 常用试剂及药品
        1.1.4 试剂盒
        1.1.5 siRNA、质粒和腺相关病毒(AAV)
        1.1.6 抗体(一抗、二抗)
        1.1.7 常用试剂配方
        1.1.8 小鼠在体心脏缺血/再灌注(I/R)模型
        1.1.9 心肌梗死面积测定
        1.1.10 在体转染腺相关病毒(AAV)
        1.1.11 Zip2-Knockout小鼠的构建及鉴定
        1.1.12 小鼠血清cTnI、LDH、CK-MB活性的测定
        1.1.13 H9c2心肌细胞的复苏
        1.1.14 H9c2心肌细胞的传代
        1.1.15 H9c2心肌细胞的冻存
        1.1.16 H9c2心肌细胞计数
        1.1.17 H9c2细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)模型
        1.1.18 质粒转染
        1.1.19 siRNA转染
        1.1.20 CCK-8 法测细胞活性
        1.1.21 Real Time Q-PCR
        1.1.22 BCA法检测蛋白浓度
        1.1.23 HE染色观察小鼠心肌形态变化
        1.1.24 流式细胞仪测细胞Zn²⁺浓度
        1.1.25 质粒转化
        1.1.26 质粒提取
        1.1.27 免疫印迹实验(Western blotting)
        1.1.28 统计学分析
    1.2 结果
        1.2.1 再灌注期心脏组织Zip2 mRNA和蛋白表达水平均增加
        1.2.2 ZnCl₂抑制再灌注期Zip2的表达
        1.2.3 Zip2过表达增加细胞内Zn²⁺浓度
        1.2.4 外源性Zn²⁺减轻缺血/再灌注损伤
        1.2.5 Zip2基因敲除(Zip2-KO)加重心肌缺血/再灌注损伤
        1.2.6 在体转染Zip2腺相关病毒能够减轻心肌缺血/再灌注损伤
        1.2.7 Zip2通过维持细胞锌稳态而发挥其心肌保护作用
    1.3 讨论
    1.4 小结
二、揭示心肌缺血/再灌注期Zip2表达增加的调控机制
    研究现状
    2.1 材料和方法
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 实验仪器
        2.1.3 常用试剂
        2.1.4 试剂盒
        2.1.5 STAT3腺相关病毒(AAV)
        2.1.6 抗体(一抗、二抗)
        2.1.7 常用试剂配方
        2.1.8 小鼠在体心脏缺血/再灌注(I/R)模型
        2.1.9 心肌梗死面积测定
        2.1.10 心肌组织总锌含量的测定
        2.1.11 在体转染腺相关病毒(AAV)
        2.1.12 小鼠血清cTnI.、LDH、CK-MB活性的测定
        2.1.13 BCA蛋白定量法
        2.1.14 免疫印迹实验(Western blotting)
    2.2 结果
        2.2.1 再灌注引起STAT3磷酸化
        2.2.2 再灌注导致心肌锌离子的丢失
        2.2.3 ZnCl₂能够抑制再灌注期STAT3的磷酸化
        2.2.4 再灌注期Zip2的表达被STAT3抑制剂逆转
        2.2.5 在体STAT3过表达促进Zip2的表达
        2.2.6 STAT3在体过表达诱导心肌保护作用
        2.2.7 Zip2基因敲除(Zip2-KO)阻断STAT3的心肌保护作用
    2.3 讨论
    2.4 小结
全文结论
论文创新点
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
附录
综述 信号传导及转录激活因子3(STAT3)在心脏疾病中的作用
    综述参考文献
致谢
个人简历



本文编号：3821992