探究miR-322/503通过调节Smurf2表达保护心肌缺血再灌注损伤的作用与机制

发布时间：2023-09-28 23:14

　　目的:心肌缺血/再灌注(I/R)是一种常见的致命性疾病,威胁着全人类的生命健康。由miR-33和miR-503组成的miR-322/503是一种X染色体miRNA簇,在早期心肌细胞中特异性表达,其功能是促进早期心肌细胞的发育。Smurf2组成的一种E3泛素连接酶。相关研究表明smad泛素调节因子2(smad ubiquitin regulatory factor 2,Smurf2)是miR-322/503的靶点。本实验以H9c2细胞作为研究对象,模拟心肌缺血再灌注(I/R)损伤处理作为体外模型,假设Smurf2是miR-322/503的下游靶点,探究miR-322/503通过调节Smurf2表达保护心肌缺血再灌注损伤的作用与机制,以期为miR-322/503在心血管疾病中的应用提供理论依据。方法:1.以H9c2细胞经缺氧和缺葡萄糖处理,再经再灌注处理作为体外模型以研究心肌缺血再灌注(I/R)损伤。2.通过qRT-PCR测定经受I/R的H9c2细胞中的miR-322/503,Smurf2,EZH2的表达水平。3.在miR-322/503转染后,通过MTT测定I/R损伤后H9c2细胞的细胞...

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第1章 引言
第2章 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 细胞与培养液配制
        2.1.2 主要试剂及产地
        2.1.3 主要仪器及设备
        2.1.4 实验器械的准备及灭菌
        2.1.5 主要实验试剂的配置
    2.2 方法
        2.2.1 H9C2细胞的体外培养
        2.2.2 RNA提取与q-RTPCR
        2.2.3 Western Blot检测蛋白表达水平
        2.2.4 免疫共沉淀
    2.3 数据的统计与分析
第3章 结果
    3.1 miR-322/503在体外I/R模型中下调
        3.1.1 经受I/R的H9c2细胞中miR-322、miR-503及EZH2 mRNA水平显著降低
        3.1.2 miR-322和miR-503的过表达显著增促进细胞增殖，抑制细胞凋亡
    3.2 Smurf2是miR-322/503的下游靶点,miR-322/503直接与Smurf2 mRNA结合,降低Smurf2表达水平保护H9c2细胞免受I/R损伤
        3.2.1 转染生物素标记的miR-322/503引并测定miR-322和miR-503水平
        3.2.2 双荧光素酶测定miR-322/503与Smurf2 mRNA的作用
    3.3 miR-322/503负性调节Smurf2表达并且敲低Smurf2 保护H9c2 细胞免受I/R损伤
        3.3.1 pre-miR-322/503转染H9c2的细胞后miR-322 和miR503水平显著提高
        3.3.2 pre-miR-322/503转染H9c2的细胞后Smurf2 蛋白表达显著降低
        3.3.3 Anti-miR-322/503沉默miR-322/503的表达使miR-322 和miR-503水平显著降低
        3.3.4 Anti-miR-322/503沉默miR-322/503的表达使Smurf2 蛋白水平显著升高
第4章 讨论
第5章 结论
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献



本文编号：3848807