PPARγ在CML/RAGE介导肝-血管对话中作用机制的研究

发布时间：2023-10-12 01:01

　　目的探讨CML/RAGE信号在动脉粥样硬化和非酒精性脂肪肝进展中的作用。方法75只6周龄雄性ApoE^-/-小鼠随机分为:对照组(普食+尾静脉注射生理盐水,n=15)、模型组(高脂饮食+尾静脉注射生理盐水,n=15)、CML组(高脂饮食+尾静脉注射CML 10mg/kg/day,n=15)、AAV-shscramble组(高脂饮食+尾静脉注射CML 10mg/kg/day+AAV-shscramble,n=15)、AAV-shRAGE组(高脂饮食+尾静脉注射CML 10mg/kg/day+AAV-shRAGE,n=15)连续饲喂16周。在4、8、16周分别进行肝脏、主动脉形态学观察(HE、油红O、Masson染色);检测相关生化指标包括:总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)以及分子生物学检测。结果(1)肝脏HE染色显示:实验4周模型组肝细胞气球样变性,CML干预后肝细胞气球样变性加重;主动脉...

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【学位级别】：硕士

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摘要1
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摘要2
abstract2
英文简写词索引
第一部分 CML/RAGE信号在动脉粥样硬化与非酒精性脂肪肝进展中的影响
    前言
    1 实验材料
        1.1 实验动物及饲料
        1.2 试剂及配制
        1.3 主要仪器
    2 实验方法
        2.1 实验动物及分组
        2.2 ApoE^-/-小鼠血清学检测
        2.3 实验标本及切片制备
            2.3.1 制备石蜡切片
            2.3.2 冰冻切片制备过程
        2.4 苏木素-伊红染色法(HE染色)
        2.5 组织油红O染色
        2.6 免疫组织化学染色
        2.7 马松染色(Masson)
        2.8 实时荧光定量PCR检测(RT-PCR)
            2.8.1 组织RNA的提取
            2.8.2 RNA纯度、浓度检测
            2.8.3 逆转录为c DNA
            2.8.4 实时荧光定量PCR扩增目的基因
            2.8.5 Real-Time PCR数据分析
    3 统计学处理
    4 结果
        4.1 CML促进ApoE^-/-小鼠肝脏脂肪变性
        4.2 CML促进ApoE^-/-小鼠血管内斑块形成
        4.3 CML促进ApoE^-/-小鼠肝脏和血管中促炎细胞因子的表达
        4.4 CML通过上调其受体RAGE促进促炎细胞因子的表达
    5 讨论
第二部分 PPARγ在CML/RAGE介导Apo E^-/-小鼠动脉粥样硬化和非酒精性脂肪肝的作用研究
    前言
    1 实验材料
        1.1 实验细胞株
        1.2 实验动物
        1.3 试剂及配制
        1.4 主要仪器
    2 实验方法
        2.1 实验动物及分组
        2.2 ApoE^-/-小鼠血清学检测
        2.3 实验标本的留取与切片制备
            2.3.1 制备石蜡切片
            2.3.2 冰冻切片制备过程
        2.4 苏木素-伊红染色(HE染色)
        2.5 细胞油红O染色及萃取
            2.5.1 油红O染色
            2.5.2油红萃取实验
        2.6 细胞培养与实验分组
        2.7 MTT法测定CML对细胞活性的影响
        2.8 RAGE siRNA转染
        2.9 RAGE siRNA干扰效率验证
        2.10 ELISA检测
        2.11 蛋白免疫印迹分析(Western blot)
            2.11.1 提取细胞蛋白
            2.11.2 检测蛋白浓度(BCA法)
            2.11.3 SDS-PAGE凝胶配制
            2.11.4 上样及SDS-PAGE电泳
            2.11.5 转膜
            2.11.6 封闭
            2.11.7 抗体孵育和曝光
        2.12 实时PCR检测(RT-PCR)
            2.12.1 细胞RNA的提取
            2.12.2 RNA纯度、浓度检测
            2.12.3 逆转录
            2.12.4 实时荧光定量PCR扩增目的基因
            2.12.5 Real-Time PCR数据分析
    3 统计学分析
    4 结果
        4.1 吡格列酮缓解CML刺激下ApoE^-/-小鼠非酒精性肝脏脂肪变性
        4.2 吡格列酮改善CML刺激下Apo E^-/-小鼠脂质紊乱、肝损以及氧化损伤
        4.3 吡格列酮抑制CML诱导ApoE^-/-小鼠动脉粥样硬化的形成
        4.4 MTT法检测CML对 HepG2 细胞活性的影响
        4.5 CML抑制HepG2 细胞内PPARγ表达
        4.6 CML通过上调RAGE抑制HepG2 细胞内PPARγ表达
        4.7 激动PPARγ下调RAGE抑制促炎性细胞因子的表达
        4.8 激动PPARγ抑制CML/RAGE介导的内皮损伤
    5 讨论
第三部分 结论
参考文献
致谢
硕士期间发表论文情况
硕士期间参加的学术活动



本文编号：3853136