27nt-miRNA对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

发布时间：2023-11-18 11:11

　　目的:探讨27nt-miRNA(27nt-miR)对氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响及分子机制。方法:体外培养HUVECs,分为正常对照组、Ox-LDL组、27nt-miR+Ox-LDL组、anti-27nt-miR+Ox-LDL组和阴性对照+Ox-LDL组。正常对照组给予正常培养;Ox-LDL组用40 mg/L Ox-LDL作用48 h诱导细胞凋亡;27nt-miR+Ox-LDL组、anti-27nt-miR+Ox-LDL组及阴性对照+Ox-LDL组分别以相同的操作方法转染相应慢病毒质粒后用40 mg/L Ox-LDL作用48 h诱导细胞凋亡。采用CCK-8法检测细胞活力,划痕实验检测细胞的迁移能力,caspase-3活性试剂盒检测细胞内caspase-3活性,RT-qPCR法和Western blot法检测细胞内Bcl-2、Bax和caspase-3 mRNA及蛋白的表达情况。结果:与阴性对照+Ox-LDL组相比,27nt-miR+Ox-LDL组HUVECs的27ntmiR高表达可显著降低细胞活力和迁移能力(P<0.05),显著...

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【文章目录】：
材料和方法
    1主要试剂和仪器
    2方法
        2.127nt-miR慢病毒载体的构建和鉴定
        2.2HUVECs慢病毒质粒转染和实验分组
        2.3CCK-8法检测HUVECs活力
        2.4划痕法检测HUVECs的迁移能力
        2.5caspase-3活性试剂盒检测caspase-3活性
        2.6Hoechst 33258染色法检测HUVECs的凋亡情况
        2.7流式细胞术检测各组HUVECs的凋亡率
        2.8RT-qPCR法检测HUVECs中Bcl-2、Bax和cas--的表达情况
        2.9Western blot法检测HUVECs中Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白表达情况
        3统计学处理
结果
    1 27nt-miR对Ox-LDL诱导的HUVECs活力的影响
    2 27nt-miR对Ox-LDL诱导的HUVECs迁移能力的影响
    3 27nt-miR对Ox-LDL诱导的HUVECs中caspase-3活性的影响
    4 27nt-miR对Ox-LDL诱导HUVECs凋亡的影响
    5 27nt-miR对Ox-LDL诱导的HUVECs凋亡率的影响
    6 27nt-miR对Bax、caspase-3和Bcl-2 mRNA表达的影响
    7 27nt-miR对Bax、caspase-3和Bcl-2蛋白表达的影响
讨论



本文编号：3865170