基于Nrf2-ARE信号途径探讨DJ-1抗心肌细胞缺氧/复氧所诱发氧化应激损伤的分子机制

发布时间：2024-01-31 02:34

　　目的:应用基因转染及RNA干扰等分子生物学手段,从Nrf2-ARE信号通路的角度探讨DJ-1上调H9c2心肌样细胞内抗氧化酶(MnSOD、CAT、GSH-Px)的表达,对抗缺氧/复氧(H/R)所诱发的氧化应激损伤的分子机制。方法:1、H9c2心肌样细胞分别经DJ-1 siRNA、阴性对照siRNA(NC siRNA)、pFlag-DJ-1重组载体及其相应的对照空质粒pFlag瞬时转染24 h后,通过Western blot检查DJ-1蛋白、抗氧化酶MnSOD、CAT、GPx蛋白表达的变化,以求观察DJ-1不同表达水平对H9c2细胞内抗氧化酶MnSOD、CAT、GPx蛋白表达的影响。2、H9c2心肌样细胞分别经DJ-1 siRNA、NC si RNA、pFlag-DJ-1、pFlag瞬时转染24 h后,建立H/R模型,通过检测以下变化,探讨DJ-1不同表达水平对H/R所诱发的氧化应激损伤的影响:(1)MTT法检测各组心肌细胞存活率的变化;(2)利用试剂盒检测各组细胞内LDH活性的变化;(3)应用比色法测定MDA含量的变化;(4)流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)含量的变化。3、H9c2...

【文章页数】：46 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
英文缩写及全称和中文对照
第1章 引言
第2章 材料与方法
    2.1 实验材料及试剂
    2.2 实验主要仪器和设备
    2.3 实验方法
        2.3.1 H9c2细胞的培养
        2.3.2 基因转导技术
        2.3.3 H9c2心肌细胞缺氧复氧H/R模型的构建
        2.3.4 免疫印迹(Western Blotting)法检测H9c2心肌细胞中蛋白表达
        2.3.5 H9c2细胞存活率和乳酸脱氢酶(LDH)活性的测定
        2.3.6 H9c2细胞内ROS与丙二醛(MDA)的含量的测定
        2.3.7 免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation，Co-IP)
        2.3.8 染色质免疫共沉淀法（Chromatin Immunoprecipitation，Ch IP）
        2.3.9 双荧光素酶报告基因检测
    2.4 处理数据
第3章 结果
    3.1 DJ-1 诱导H9c2细胞内抗氧化酶表达，对抗H/R诱发的氧化应激
    3.2 DJ-1 激活H9c2细胞内Nrf2-ARE信号通路
    3.3 Nrf2-ARE信号通路介导DJ-1 上调抗氧化酶蛋白表达
    3.4 Nrf2-ARE信号通路的激活介导DJ-1 对抗H/R所诱发氧化应激损伤
第4章 讨论
第5章 结论
    5.1 结论
    5.2 展望
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献



本文编号：3890803