同型半胱氨酸致内皮细胞线粒体功能障碍机制研究

发布时间：2024-02-07 04:27

　　背景:心血管疾病严重威胁人类身体健康,已位列全球致死疾病之首。动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是众多心血管疾病共同的主要病理基础。内皮细胞是血管壁的重要组成部分,在调节血流、血小板激活、白细胞粘附等过程中发挥不可或缺的作用。当血管内皮细胞受损时,血管收缩和舒张平衡被打破,内皮功能受到影响。而内皮细胞功能障碍是多种心血管疾病发生过程中的始动因素或促进因素。因此,早期防治内皮功能障碍是预防和治疗心血管疾病的关键。同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)是心血管疾病特别是动脉粥样硬化的一个独立、重要的危险因子。Hcy是人体内甲硫氨酸代谢过程中产生的中间产物。空腹血浆中Hcy高于15μM被称为高同型半胱氨酸血症(Hyperhomocysteinemia,HHcy)。研究表明HHcy与血管内皮细胞损伤相关,可能与氧化应激、炎症应答、亚硝基化水平下调等方面有关,但具体机制仍不明确,因此继续寻找治疗Hcy引起心血管疾病,特别是动脉粥样硬化的靶点至关重要。线粒体不仅是细胞合成ATP的主要场所,还参与诸如钙稳态平衡、信号传导、自噬等诸多生物进程。研究发现在心血管疾病患者的内皮...

【文章页数】：87 页

【学位级别】：硕士

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致谢
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论文创新点
缩略词表
引言
实验试剂与仪器
    1 细胞
    2 实验仪器
    3 实验试剂
    4 实验抗体
    5 实验溶液
        5.1 D,L-Hcy配制
        5.2 实验相关溶液配制
实验方法
    1 内皮细胞贴壁培养
    2 MTT法检测内皮细胞活力
        2.1 不同浓度Hcy处理内皮细胞24 h对细胞活力的影响
        2.2 同一浓度Hcy处理内皮细胞不同时间对细胞活力的影响
    3 透射电镜观察Hcy对内皮细胞亚细胞结构的影响
    4 JC-1染色检测内皮细胞线粒体膜电位
    5 内皮细胞总一氧化氮(NO)水平测定
    6 内皮细胞活性氧(ROS)水平检测
    7 内皮细胞ATP含量检测
    8 内皮细胞线粒体Ca²⁺浓度检测
    9 细胞免疫荧光检测蛋白表达
    10 蛋白质免疫共沉淀检测蛋白质-蛋白质相互作用
    11 Western-blot检测内皮细胞蛋白水平
        11.1 细胞蛋白提取
            11.1.1 细胞总蛋白提取
            11.1.2 线粒体蛋白提取
        11.2 蛋白质免疫印迹(Western-blot)
    12 数据分析
第一部分 Hey引起内皮细胞线粒体毒性作用研究
    1 实验结果
        1.1 Hcy减弱内皮细胞活力
        1.2 Hcy对内皮细胞损伤的影响
            1.2.1 Hcy下调内皮细胞标志蛋白表达
            1.2.2 Hcy引起内皮细胞舒张因子和收缩因子失衡
        1.3 Hcy对内皮细胞亚细胞结构的影响
        1.4 Hcy引起内皮细胞线粒体功能障碍
            1.4.1 Hcy引起内皮细胞线粒体膜电位降低
            1.4.2 Hcy引起内皮细胞ATP水平降低
            1.4.3 Hcy引起细胞内ROS水平升高
    2 讨论
    3 小结
第二部分 Hey致内皮细胞线粒体功能障碍的机制研究
    1 实验结果
        1.1 Hcy引起内皮细胞线粒体Ca²⁺浓度升高
        1.2 Hcy致内皮细胞线粒体Ca(2+)浓度升高可能与MAM结构增强有关
        1.3 Hcy致线粒体Ca²⁺浓度升高是其引起内皮细胞线粒体功能障碍的重要原因
        1.4 Hcy通过升高线粒体Ca²⁺浓度激活GSK3β影响线粒体动态平衡
        1.5 Hcy致线粒体Ca²⁺浓度升高参与其引起的内皮细胞线粒体自噬
    2 讨论
    3 小结
总结
参考文献
综述
    参考文献
作者简历及在读期间所获成果



本文编号：3896759