香烟烟雾提取物经内质网应激CHOP信号通路促进人肺动脉内皮细胞凋亡

发布时间：2024-02-18 02:24

　　目的:明确香烟烟雾提取物是否经内质网应激CHOP信号通路促进人肺动脉内皮细胞凋亡,以及苯基丁酸(PBA)是否具有凋亡抑制作用。方法:通过慢病毒转染重组RNA沉默HPAEC人肺动脉内皮细胞CHOP基因表达,将未进行CHOP基因干预的HPAEC人肺动脉内皮细胞及CHOP基因沉默的HPAEC^-CHOP人肺动脉内皮细胞各自分为对照组(Ctrl组,常规培养不作特殊处理)、香烟烟雾提取物组(CSE组,培养基中加入10%香烟烟雾提取物)、苯基丁酸组(PBA组,培养基中加入5mmol/L的PBA)和香烟烟雾提取物联合苯基丁酸组(CSE+PBA组,培养基中加入10%香烟烟雾提取物以及5mmol/L的PBA),各组细胞分别处理6h、12h、24h,收集后用于后续实验。通过透射电镜观察细胞内质网形态变化,利用流式细胞仪检测细胞凋亡比例,Western-blot检测CHOP蛋白表达水平,Realtime-PCR检测CHOP mRNA表达水平。P<0.05认为差异具有统计学意义。结果:1.HPAEC^-CHOP细胞CHOP蛋白表达水平较HPAEC细胞降低大于80%...

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图3.1倒置显微镜下细胞形态观察及免疫组化染色鉴定注：A1、A2：倒置相差显微镜下细胞形态观察（100×）、（200×）；B1、B2：CD31抗体HPAECs免疫组化染色（100×）、（400×）；C1、C2：vWF抗体HPAECs免疫组化染色（100×）、（400×）

33图3.1倒置显微镜下细胞形态观察及免疫组化染色鉴定：A1、A2：倒置相差显微镜下细胞形态观察（100×）、（200×）；B1、B2：CD31抗体PAECs免疫组化染色（100×）、（400×）；C1、C2：vWF抗体HPAECs免疫组化染色（100×）、（400....

图3.2荧光显微镜观察细胞慢病毒感染情况（100×）

图3.2荧光显微镜观察细胞慢病毒感染情况（100×）2：对照组白光图、荧光图；B1、B2：空载组白光图、荧光图；C1、C2：cho、荧光图；D1、D2：chop-shRNA#2组白光图、荧光图；E1、E2：chop-荧光图

图3.3慢病毒干扰细胞内质网应激后CHOP蛋白表达水平注：△P＜0.05VS对照组；▲P＜0.05VSChop-shRNA#3

附图CHOP（29KD）β-actin（42KChop-shRNA#3Chop-shRNA#2Chop-shRNA#1照对组组载空

图3.4各组细胞不同干预条件处理24h后透射电镜下内质网形态(5K倍)

HPAEC细胞:PBA组HPAEC-CHOP细胞:PBA组HPAEC细胞:CSE组HPAEC-CHOP细胞:CSE组

本文编号：3901731