敲除miR-223促进血管炎症和动脉粥样硬化的发生

发布时间：2024-02-22 11:12

　　目的研究miR-223对血管炎症和动脉粥样硬化的影响,为临床动脉硬化性疾病提供新的诊疗方向。方法 miR-223敲除鼠与ApoE敲除鼠(ApoE KO)繁殖制备miR-223/ApoE双敲鼠(miR-223/ApoE DKO);检测小鼠血浆脂质水平;处死取材后检测主动脉根部及血管全长的斑块含量;通过免疫组化检测斑块的炎症细胞浸润;转录组学测序分析血管中炎症相关基因的表达;结合microRNA靶基因数据库寻找并验证其可能的靶基因。结果 miR-223/ApoE双敲鼠主动脉根部及血管全长斑块量显著增加(P<0.05)。免疫组化染色显示,主动脉根部炎症细胞浸润增加;血管转录组学测序发现炎症相关基因血管细胞黏附分子1(VCAM-1)、白细胞介素1α(IL-1α)等在双敲鼠中显著上调。通过靶基因数据库筛选,发现白细胞介素6(IL-6)是miR-223的靶基因并且在双敲鼠的血管中表达显著上调;使用miR-223模拟物刺激成纤维细胞,显著抑制了IL-6的表达。结论 miR-223抑制靶基因IL-6的表达降低炎症反应,敲除miR-223显著升高血管炎症水平促进动脉粥样硬化的进展。

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【部分图文】：

图1.ApoEKO小鼠和miR-223/ApoEDKO小鼠动脉粥样硬化情况的比较

与ApoEKO小鼠比较,miR-223/ApoEDKO小鼠miR-223含量几乎检测不到,证实miR-223敲除成功(图1A)。miR-223/ApoEDKO小鼠和ApoEKO小鼠普通饲料喂饲6个月,与ApoEKO小鼠比较,DKO小鼠主动脉全长斑块油红O染色面积增多(图....

图2.ApoEKO小鼠和miR-223/ApoEDKO小鼠血浆脂质水平

血浆脂质水平是影响动脉粥样硬化进展的关键因素,因此检测了miR-223/ApoEDKO小鼠及ApoEKO小鼠的非禁食血浆生化指标。结果显示,miR-223/ApoEDKO小鼠呈现高胆固醇血症,血浆胆固醇水平为514.8±21.42mg/dL,但与ApoEKO小鼠(517....

图3.ApoEKO和miR-223/ApoEDKO小鼠炎症细胞标志物Mac2及平滑肌标志物SM22染色结果的比较(免疫组化)

miR-223主要由免疫细胞产生,是调节炎症反应的关键microRNA[12]。因此,进一步检查miR-223敲除对血管炎症的影响。通过斑块免疫组化染色,发现DKO小鼠斑块中Mac2染色增加,提示炎症细胞浸润增多(图3)。同时,分离血管组织进行转录组学测序,基因表达量用FPKM衡....

图4.ApoEKO和miR-223/ApoEDKO小鼠血管转录组学测序数据分析炎症相关基因表达(n=3)

图3.ApoEKO和miR-223/ApoEDKO小鼠炎症细胞标志物Mac2及平滑肌标志物SM22染色结果的比较(免疫组化)2.4miR-223可能通过靶基因IL-6调控血管炎症及动脉粥样硬化进展

本文编号：3906690