转录因子SOX2对体外血管生成能力的影响

发布时间：2017-05-25 12:30

  本文关键词：转录因子SOX2对体外血管生成能力的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景:血管生成,是从已有血管生成新血管的过程,主要步骤包括血管内皮细胞的增殖、迁移及管状血管结构的形成。在胚胎发育过程中,血管生成促进胎儿循环系统的建立。在伤口愈合过程中,血管生成促进组织的修复和再生。病理情况下,如肿瘤,血管生成促进肿瘤的生长和转移。所以针对血管生成的研究对相关疾病的治疗非常重要。尤其在肿瘤治疗中,针对肿瘤血管作为治疗靶点的药物已在临床广泛应用。SOX(SRY-related HMG box)是一类性别决定基因SRY(sex-determining region of the Y chromosome)相关基因家族,编码一系列SOX家族的转录因子。该蛋白家族拥有高度保守的DNA结合域,被称为HMG(high-mobility-group)box域,该结构域包含约80个氨基酸。SOX2(SRY-related high-mobility-group box 2)为SOX家族转录因子成员之一,属于SOX家族的B组。转录因子SOX2能够结合在基因上游特异核苷酸序列上,调控基因的转录。SOX2发挥多种作用:SOX2是最初被用于从成纤维细胞获得诱导型多能干细胞的关键转录因子之一;SOX2对维持胚胎干细胞的自我更新与多向分化起关键作用;可以调控神经发育,以及调控晶状体和味蕾的发育等。SOX2在大多数肿瘤中高表达,且已被广泛证实与肿瘤细胞的增殖与转移侵袭等多种生物学行为存在密切关系。在正常血管以及内皮细胞来源的血管内皮细胞瘤中,SOX2存在差异表达。作为重要的转录因子,SOX2是否参与调控血管生成过程?因人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cell,HUVEC)可代表人体内绝大多数血管内皮细胞代谢和对外界生理、毒理反应的特征,故HUVEC已被许多研究者作为内皮细胞模型。本研究以HUVEC为研究对象。方法:应用脂质体转染的方法,构建高表达SOX2的HUVEC;应用细胞免疫荧光法检测SOX2的表达及定位;应用RT-q PCR检测SOX2 m RNA水平;Western Blot法检测蛋白水平,确定高表达是否成功。应用CCK-8、Ed U法检测HUVEC细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期;划痕实验和Transwell小室法检测细胞迁移能力;matrigel胶实验检测细胞成管能力。结果:1.脂质体转染pc DNA3.0-SOX2质粒构建高表达SOX2的HUVEC(SOX2+),对照组为脂质体转染pc DNA3.0质粒构建的空载体HUVEC(Empty Vector,EV);细胞免疫荧光方法染色定位SOX2表达在细胞核,SOX2+组与EV组细胞SOX2荧光阳性率无统计学差异;SOX2+组与EV组SOX2荧光强度分别为82.6%和2.9%,有统计学差异(P0.001);利用RT-q PCR、Western Blot分别在m RNA、蛋白水平进行验证,与EV组对比,SOX2+组在m RNA、蛋白水平均增高。2.CCK-8检测,与EV组相比,SOX2+组细胞增殖能力提高,有统计学差异(P0.05);Ed U法检测,EV组的细胞阳性率小于20%,SOX2+组细胞阳性率近30%,有统计学差异(P0.05);流式细胞术检测细胞周期,相较于EV组增殖指数53.62%,SOX2+组增殖指数约55.45%,有统计学差异(P0.05)。3.划痕实验检测HUVEC迁移能力,在12h观察点,SOX2+组细胞迁移指数为1.27,显著高于EV组,有统计学差异(P0.01);在24h的观察点,SOX2+组细胞迁移指数为1.75,显著高于EV组,有统计学差异(P0.001);利用Transwell小室结晶紫染色观察到HUVEC迁移进入下室,统计迁移细胞数目,SOX2+组迁移细胞数目相比EV增多,有统计学差异(P0.01)。4.matrigel胶实验检测HUVEC成管能力,SOX2+组小管节点为25±5,相比EV组18±3增高,有统计学差异(P0.05);SOX2+组小管总长度为341μm,相比EV组284μm增高,有统计学差异(P0.05)。结论:转录因子SOX2可以促进HUVEC细胞增殖、迁移及管道形成能力,提示SOX2在体外血管生成中发挥重要作用。
【关键词】：血管生成 人脐静脉内皮细胞 SOX2
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R54
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 英文缩略词表9-12
• 第1章 文献综述12-18
• 第2章 实验材料与方法18-31
• 2.1 实验材料和仪器18-19
• 2.1.1 主要仪器及耗材18
• 2.1.2 主要试剂18-19
• 2.2 实验方法19-31
• 2.2.1 HUVEC细胞培养19-20
• 2.2.2 质粒的扩增和提取20-21
• 2.2.3 脂质体转染21
• 2.2.4 细胞免疫荧光21-22
• 2.2.5 RNA提取以及RT-q PCR分析22-24
• 2.2.6 蛋白提取以及Western Blot分析24-26
• 2.2.7 CCK-8 检测细胞增殖26
• 2.2.8 Ed U检测细胞增殖26-27
• 2.2.9 流式细胞术检测细胞周期27-28
• 2.2.10 划痕实验检测细胞迁移28
• 2.2.11 Transwell小室检测细胞迁移28-29
• 2.2.12 管道形成实验29-30
• 2.2.13 统计学分析30-31
• 第3章 实验结果31-41
• 3.1 HUVEC中SOX2的表达31-32
• 3.1.1 形态学特征31
• 3.1.2 HUVEC中SOX2的表达量31-32
• 3.2 制备高表达SOX2 HUVEC32-34
• 3.2.1 HUVEC中SOX2表达的定位32-33
• 3.2.2 高表达SOX2 HUVEC鉴定33-34
• 3.3 高表达SOX2 HUVEC细胞增殖、迁移、成管能力鉴定34-41
• 3.3.1 细胞增殖能力鉴定34-37
• 3.3.2 细胞迁移能力鉴定37-39
• 3.3.3 细胞成管能力鉴定39-41
• 第4章 讨论41-44
• 第5章 结论44-45
• 参考文献45-50
• 作者简介及攻读硕士期间的研究成果50-51
• 致谢51

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王淑美,徐晓玉,张文亮;调控血管生成中药的研究现状[J];时珍国医国药;2004年09期

2 王国庆,易成,周宏远;因特网上的血管生成研究资源[J];中国微循环;2004年04期

3 练燕;抑制血管生成:第五类抗癌疗法?[J];国外医学.护理学分册;2004年10期

4 金艳,王秀琴;血管生成与抗血管生成策略[J];食品与药品;2005年09期

5 贾林,袁世珍;肿瘤抗血管治疗现状与血管生成抑制-细胞毒疗法[J];广州医学院学报;2000年02期

6 方全;血管生成素与肿瘤新生血管生成[J];国外医学(生理、病理科学与临床分册);2001年05期

7 曹健,郭德玉,张恩娟;血管生成与疾病治疗[J];中国药房;2001年07期

8 王国庆,易成;血管形成新方式——拟血管生成[J];国外医学(肿瘤学分册);2003年04期

9 邹戈;肿瘤血管生成与抗血管生成研究进展[J];国外医学.泌尿系统分册;2003年01期

10 张天飞,蒋登金,郭光金;血管内皮生长因子与血管生成的研究进展[J];局解手术学杂志;2003年04期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 马强;陈刚;徐晓玉;;中药对血管生成影响研究进展[A];全国第3届临床中药学学术研讨会论文集[C];2010年

2 林秀坤;;新生血管生成与靶向抗肿瘤海洋药物的研制策略[A];2007年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2007年

3 战忠利;孙蕾娜;孙慧;贾春实;;肺癌血管生成与血管生成抑制物之间相互关系的研究[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集[C];2006年

4 战忠利;;肺癌血管生成与血管生成抑制物之间相互关系的研究[A];中华医学会病理学分会2006年学术年会论文汇编[C];2006年

5 刘丽华;易爱纯;;抗血管生成与血管依赖性实体瘤的治疗[A];2009年中国药学大会暨第九届中国药师周论文集[C];2009年

6 刘丽华;易爱纯;;抗血管生成与血管依赖性实体瘤的治疗[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年

7 李平;王国庆;;血管靶向及抗血管生成联合放射治疗的研究进展[A];第一届中国肿瘤靶向治疗技术大会论文集[C];2003年

8 卞修武;;癌症和慢性炎症血管生成的调控差异及其治疗学意义[A];第三届中国肿瘤学术大会教育论文集[C];2004年

9 李龙江;温玉明;王昌美;陈江;;抑制血管生成诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究[A];第一届全国口腔颌面部肿瘤学术会议论文汇编[C];2001年

10 沈明秀;王凯;蔡连香;岳开琴;张树成;李巧风;陈秋梅;;试探中医血足则子宫易于容物的内涵实验之一血管生成[A];全国第六届中西医结合妇产科学术会议论文及摘要集[C];2002年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 王迪;血管生成药等待发力[N];医药经济报;2007年

2 丁志山 沃兴德;中药对血管生成影响的研究进展[N];中国医药报;2003年

3 徐蓓;血管生成：从药用植物到血管的研究 Angiogenesis:From Plants to Blood Vessels[N];中国医药报;2006年

4 白冰　编译;癌细胞血管生成学说有新变化[N];中国医药报;2008年

5 刘道安;抑制肺癌血管生成“饿死”癌细胞[N];中国医药报;2002年

6 徐峰;肿瘤与血管生成息息相关[N];医药经济报;2001年

7 记者刘道安;中药对肺癌血管生成有抑制作用[N];中国中医药报;2002年

8 记者 白毅;miRNA在多糖介导的血管生成抑制中起重要作用[N];中国医药报;2014年

9 渔阳;抗血管生成类药物：有前瞻性的暴利领域[N];医药经济报;2006年

10 徐峰;肿瘤与血管生成息息相关[N];医药经济报;2001年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 王付海;T7肽通过下调Ang-2表达及联合3-MA发挥其抗血管生成的实验研究[D];山东大学;2015年

2 向劲松;基于转基因斑马鱼模型的清热解毒类中药抗血管生成筛选及对照研究[D];成都中医药大学;2015年

3 刘建昆;IL-17在结直肠癌血管生成中的作用及机制研究[D];第三军医大学;2011年

4 王心华;力达霉素和大黄素的抗血管生成和抗转移作用及其机制研究[D];中国协和医科大学;2001年

5 张彦民;塔斯品碱抑制血管生成的作用及初步机制研究[D];西安交通大学;2008年

6 董豪杰;血管生成素对miR-141的调控作用及其在血管生成中的功能[D];浙江大学;2014年

7 王婷;咖啡酸苯乙酯抗氧化、促氧化及抗血管生成相关机制的研究[D];兰州大学;2007年

8 房长存;基质金属蛋白酶8在血管生成中的作用机制研究[D];山东大学;2013年

9 甄红英;抗肿瘤抗生素C1027抑制血管生成和肿瘤转移及其作用机制研究[D];中国协和医科大学;1997年

10 朱珂;ATF4调节骨血管生成的作用和机制的研究[D];南开大学;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 刘玉芝;含硒复合物对犬乳腺肿瘤细胞CTM1211的生长抑制和血管生成相关因子的调节作用[D];华中农业大学;2015年

2 荣倩倩;参芪抑瘤方对荷瘤小鼠H_(22)肝癌的抑制作用及抗血管生成机制研究[D];甘肃中医药大学(原名：甘肃中医学院);2015年

3 闫锴;血管生成素-2（Angiopoietin-2）调节小鼠下肢缺血血管生成的研究[D];四川医科大学;2015年

4 于玲;远隔预处理对大鼠脑缺血后血管生成及其相关因子表达影响的研究[D];复旦大学;2014年

5 陈士雯;MiR-494调控蜕膜MSCs影响子痫前期发病的机制研究[D];南京大学;2015年

6 丁s，

本文编号：393770