抵抗素通过AMPK/FOXO3a通路介导自噬诱导H9c2心肌细胞肥大

发布时间：2024-07-08 22:29

　　目的:探究抵抗素导致H9c2心肌细胞肥大是通过调控AMPK/FOXO3a信号通路和自噬活动及其可能的分子机制。方法:培养H9c2心肌细胞,待生长活力良好时,用含胎牛血清浓度为0.1%的培养基对细胞进行饥饿24h。根据实验目的分为两大部分:第一部分将细胞分为4组,分别是Con组:对照组;Res组:抵抗素50 ng/mL组;(Res+Met)组:抵抗素50 ng/m L加二甲双胍2 mmol/L组;Met组:二甲双胍2 mmol/L组。第二部分同样将H9c2心肌细胞分为4组,依次是Con组:对照组;Res组:抵抗素50 ng/mL组;(Res+Rap)组:抵抗素50 ng/mL加雷帕霉素100nmol/L组;Rap组:雷帕霉素100nmol/L组。用Image J分析细胞表面积;BCA法测定单细胞蛋白含量;实时荧光PCR(RT-qPCR)检测心肌肥大相关胚胎基因BNF、β-MHC的表达量;Western Blot检测p-FOXO3a、p-AMPK、p-m TOR、FOXO3a、AMPK、mTOR等通路蛋白表达及自噬相关蛋白Beclin1、LC3表达量。结果:(1)抵抗素能明显增大H9c2心...

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图1.抵抗素导致H9c2心肌细胞肥大的可能机制

3图1.抵抗素导致H9c2心肌细胞肥大的可能机制。抵抗素可与细胞膜上的TLR4/MD2受体结合，通过细胞内信号转导激动LKB1/AMPK/TSC2/Rheb信号分子，抑制mTORC1进一步促进了自噬从而导致心肌细胞肥大，此外mTORC1

图1各组药物干预后的H9c2心肌细胞形态

2.1.1抵抗素对心肌细胞面积变化的调节作用抵抗素诱导心肌细胞表面积增大，但可以分别被二甲双胍改善。细胞相应处理36h后，观察细胞贴壁生长，呈长梭形，胞质丰富，细胞大小可见差异。Con组：（4147±141.7），Res组：（7554±265.2），Res+Met组（....

图2不同药物处理心肌细胞36h后，使用ImageJ软件分析细胞表面积的变化

图2不同药物处理心肌细胞36h后，使用ImageJ软件分析细胞表面积的变化细胞表面积。**表示P<0.01。2.1.2抵抗素对心肌细胞单细胞蛋白含量的调节作用抵抗素诱导心肌细胞蛋白含量增多，但可以分别被二甲双胍、雷胞相应处理36h后，观察细胞贴壁生长，....

图2药物处理后，各实验组单细胞蛋白含量

图2药物处理后，各实验组单细胞蛋白含量。抵抗素可以增加单细胞内的0.05。2.1.3抵抗素对心肌细胞胚胎基因的调节作用细胞对应处理36h后，提取RNA反转录后实时荧光定量PCR分β-MHC的相对表达量。BNF结果：Con组：1.0，Res组：（10.2±组（2.....

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