缺氧预适应通过Nrf2通路上调抗氧化酶介导心肌细胞延迟保护的实验研究

发布时间：2025-03-30 01:13

　　目的： 构建靶向Nrf2基因的siRNA真核表达重组载体，转染H9c2心肌样细胞，利用缺氧/复氧(H/R)损伤模型及缺氧预适应（HPC）延迟保护模型，从Nrf2-ARE信号通路的角度，探讨HPC上调抗氧化酶（HO-1、MnSOD）介导心肌细胞延迟保护的新途径。 方法： 1.利用siRNA真核表达载体pGPU6/GFP/Neo，设计并构建靶向Nrf2的RNA干扰重组质粒pGPU6/GFP/Neo-Nrf2siRNA，同时设计并构建阴性对照RNA干扰重组载体，用于鉴定pGPU6/GFP/Neo质粒介导的RNA干扰体系的特异性； 2.通过Western Blot法分别检测H9c2心肌样细胞经HPC处理后0、12、24、48、72h各时间点的Nrf2核转位变化；并在Nrf2核转位最显著的时间点，应用染色质免疫共沉淀（ChIP）法检测胞核内Nrf2与HO-1及MnSOD基因启动子区内抗氧化反应元件（ARE）结合的变化； 3. H9c2细胞经pGPU6/GFP/Neo-Nrf2siRNA重组载体或阴性对照载体pGPU6/GFP/Neo-NC siRNA瞬时转染24h后，建立HPC...

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
英文缩写及全称和中文对照
第1章 引言
第2章 材料与方法
    2.1 实验主要材料
        2.1.1 细胞株、质粒来源
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要实验用液的配置
        2.1.4 实验主要仪器和设备
    2.2 实验方法与步骤
        2.2.1 H9c2 细胞培养
        2.2.2 构建靶向 Nrf2 基因的 siRNA 表达载体
        2.2.3 基因转导技术
        2.2.4 实验模型的建立
        2.2.5 ChIP 技术
        2.2.6 实验设计与分组
        2.2.7 观察指标与方法
    2.3 数据处理
第3章 结果
    3.1 重组质粒 pGPU6/GFP/Neo-Nrf2 siRNA 与 pGPU6/GFP/Neo-NC siRNA 的测序鉴定
    3.2 HPC 对 Nrf2-ARE 信号通路的影响
    3.3 Nrf2-ARE 信号通路对 HPC 上调细胞抗氧化酶蛋白表达的影响
    3.4 Nrf2-ARE 信号通路对 HPC 发挥延迟保护作用的影响
    3.5 Nrf2-ARE 信号通路对 HPC 增强 H9c2 细胞抗氧化应激能力的影响
第4章 讨论
第5章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献



本文编号：4037952