PHLDA1在H 2 O 2 诱导的H9c2心肌细胞损伤和心肌缺血再灌注损伤中的机制研究

发布时间：2025-04-26 22:50

　　目的:在心血管疾病中,由于心肌缺血再灌注造成的死亡占很大比例。其中,在再灌注过程中,会观察到氧化应激损伤的产生。在缺血/再灌注模型中观察到,当系统无法在氧化剂分子的生产和利用之间建立平衡时,会产生氧化应激。氧化应激过程中活性氧（reactive oxygen species,ROS）的过量产生导致蛋白质,DNA和脂质损伤,引起细胞损伤。PHLDA1首先在T细胞受体激活诱导的细胞凋亡中被鉴定出来,目前的研究表明PHLDA1在不同的细胞种类和刺激下起到不同的作用,目前关于PHLDA1在氧化应激诱导的心肌细胞（H9c2）损伤和心肌缺血再灌注损伤中的作用尚未报道。本研究主要探究PHLDA1在氧化应激诱导的心肌细胞损伤和心肌缺血再灌注损伤中的作用,以及PHLDA1通过结合Bax在氧化应激诱导的心肌细胞损伤中的作用机制。研究方法:1、培养H9c2心肌细胞,分别用不同浓度的H₂O₂处理细胞。CCK8实验观察细胞活力、流式细胞术检测细胞凋亡。用Western blot检测PHLDA1蛋白和凋亡相关蛋白caspase 3,PARP1的表达水平。筛选合适药物浓度用...

【文章页数】：90 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略语
1前言
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞系
        2.1.2 实验动物和饲料
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 主要仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞传代与培养
        2.2.2 细胞转染
        2.2.3 细胞计数
        2.2.4 细胞分组
        2.2.5 CCK8测定H9c2心肌细胞存活率
        2.2.6 流式测定H9c2心肌细胞凋亡率
        2.2.7 JC-1测定H9c2心肌细胞线粒体膜电位
        2.2.8 ROS测定细胞内ROS
        2.2.9 RT-q PCR测定小干扰RNA敲减效率
        2.2.10 大鼠尾静脉注射及离体心脏造模
        2.2.11 TTC染色测定心肌梗死面积
        2.2.12 HE染色测定心肌组织形态
        2.2.13 Tunel测定心肌组织凋亡率
        2.2.14 IHC测定Cleaved-caspase3表达量
        2.2.15 WB检测蛋白量的多少
        2.2.16 免疫共沉淀测定蛋白互作
        2.2.17 统计学分析
3 结果
    3.1 H₂O₂ 刺激H9c2 心肌细胞可以引起PHLDA1 表达增加
    3.2 过表达PHLDA1 加重氧化应激诱导的H9c2 心肌细胞损伤
    3.3 敲减PHLDA1 减轻氧化应激诱导的H9c2 心肌细胞损伤
    3.4 敲减PHLDA1减轻离体心脏缺血再灌注损伤
    3.5 Bax被鉴定为PHLDA1 新的结合蛋白并且在氧化应激情况下结合增强
    3.6 PHLDA1 通过蛋白酶体途径调节Bax稳定性
4 讨论
5 结论
本文创新性自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：4041485