亲环素A对ox-LDL诱导的RAW264.7细胞中NF-κB、M-CSF和ZFP36表达的影响

发布时间：2017-06-05 00:00

  本文关键词：亲环素A对ox-LDL诱导的RAW264.7细胞中NF-κB、M-CSF和ZFP36表达的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：一、亲环素A、NF-κB、M-CSF和ZFP36在氧化低密度脂蛋白诱导的RAW264.7细胞中表达的改变 目的观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)处理RAW264.7细胞不同时间后，亲环素A(CypA)、核转录因子B (NF-κB)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和锌指蛋白36(ZFP36)在细胞中表达之间存在的关系。 方法实验过程中过首先使用ox-LDL孵育RAW264.7细胞不同的时间(0,4,8,12h)，采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法，检测亲环素A mRNA的表达的变化，采用蛋白免疫印迹(Western blot)的方法分别检测亲环素A、NF-κB和ZFP36的蛋白表达的改变；酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测M-CSF表达的改变。 结果Ox-LDL与RAW264.7细胞共同孵育，与对照组相比，ox-LDL处理细胞4h、8h和12h组，RT-PCR检测发现亲环素A的mRNA表达均明显增强，差异有显著性(P0.05)，尤以8h时表达量最高。Western blot检测的亲环素A蛋白表达的结果也呈现相似的趋势，故在后续实验中，ox-LDL处理细胞的时间选择8h。同步检测的NF-κB p65的蛋白表达结果显示亲环素A一致的趋势，与对照组相比，ox-LDL处理细胞4h、8h和12h组，蛋白表达均明显增强，在处理8h时表达量最高，差异有显著性(P0.05)；而I-κBα蛋白质的表达趋势恰好与NF-κB p65的蛋白表达结果相反，各组较对照组表达均明显降低，在处理8h组表达量最低，差异有显著性(P0.05)。Western-blot检测还发现ZFP36的蛋白表达也在ox-LDL处理细胞4h、8h和12h后明显减弱，而且8h组表达改变程度最明显，差异有显著性(P0.05)。ELISA检测结果显示细胞内M-CSF的表达明显增强，在处理8h时表达量最高，差异有显著性(P0.05)。 小结Ox-LDL可促进RAW264.7细胞中亲环素A、NF-κB和M-CSF的表达，而降低细胞中ZFP36的蛋白表达。 二、亲环素AsiRNA对氧化低密度脂蛋白诱导的RAW264.7细胞中NF-κB、M-CSF和ZFP36的表达的影响 目的通过亲环素A siRNA沉默RAW264.7细胞中亲环素A的表达，观察细胞中NF-κB、M-CSF和ZFP36表达水平的改变。 方法按Invitrogen公司提供的脂质体LipofectamineTM2000转染程序，将亲环素A siRNA转入RAW264.7细胞，RT-PCR和Western-blot分别检测亲环素AmRNA和蛋白表达的改变；在第一部分实验的基础上，选择50mg/L和8h作为ox-LDL处理细胞的浓度和时间，Western blot检测NF-κB p65、I-κBα和ZFP36蛋白的表达改变；ELISA检测M-CSF蛋白表达的改变。 结果RT-PCR和Western-blot检测发现转染组亲环素AmRNA和蛋白质的表达较对照组均明显降低，差异有显著性(P0.05)，可以用于后续实验。经ox-LDL处理的亲环素A siRNA转染RAW264.7细胞组与对照组相比，NF-κB p65蛋白的表达明显降低，而I-κBα蛋白的表达明显增加，，差异均有显著性(P0.05)。Western blot检测，经ox-LDL处理的亲环素A siRNA转染组ZFP36蛋白质的表达也明显增加，差异有显著性(P0.05)，ELISA检测则显示M-CSF的表达降低，差异有显著性(P0.05)。 小结亲环素AsiRNA可延缓ox-LDL诱导的RAW264.7细胞中NF-κB、M-CSF蛋白表达的上调和ZFP36蛋白表达的下调。 结论 1Ox-LDL可促进RAW264.7细胞中亲环素A、NF-κB和M-CSF的表达和降低细胞中ZFP36的蛋白表达。 2亲环素A siRNA可延缓ox-LDL诱导的RAW264.7细胞中NF-κB、M-CSF蛋白表达的上调和ZFP36蛋白表达的下调。
【关键词】：亲环素A 氧化低密度脂蛋白 RAW264.7细胞 核因子κB
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R543.5
【目录】：

• 中文摘要4-7
• ABSTRACT7-10
• 前言10-13
• 实验材料13-15
• 实验方法15-20
• 实验结果20-28
• 讨论28-31
• 结论31-32
• 参考文献32-38
• 主要的缩略语和英文索引38-40
• 文献综述40-54
• 参考文献51-54
• 硕士期间已发表的论文54-55
• 致谢55-56
• 基金资助56

【参考文献】

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1 黄水清;沈小燕;韩凌;王斌;王剑;李杰芬;;当归补血汤含药血清对ox-LDL激活单核细胞p38 MAPK的作用[J];中药新药与临床药理;2010年05期

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1 曾柏生;有氧运动对APOE基因缺陷小鼠血脂代谢的影响以及有氧运动调节血脂代谢以外的其他抗动脉粥样硬化机制的探讨[D];扬州大学;2003年

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本文编号：422412