miR-328对高糖诱导人脐静脉内皮细胞间质转分化的调控及信号机制

发布时间：2017-06-08 16:06

  本文关键词：miR-328对高糖诱导人脐静脉内皮细胞间质转分化的调控及信号机制，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:通过高糖诱导构建人脐静脉内皮细胞间质转分化模型,探讨miR-328在内皮细胞间质转分化中的调控作用以及MEK1/2-ERK1/2信号通路在其中的作用。方法:培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),高糖诱导间质转分化;构建携带miR-328和antagomiR-328基因的重组慢病毒,转染HUVECs。将实验分为九组:(1):HUVECs+正常葡萄糖(5.5mmol/L),(2):HUVECs+甘露醇对照组(30mmol/L),(3):HUVECs+高浓度葡萄糖(30mmol/L),(4):HUVECs+miR-328,(5):HUVECs+miR-328病毒阴性对照,(6):HUVECs+高浓度葡萄糖+antagomiR-328,(7):HUVECs+高浓度葡萄糖+antagomiR-328病毒阴性对照,(8):HUVECs+高浓度葡萄糖+U0126(10μmol/L),(9):HUVECs+miR-328+U0126(10μmol/L)。免疫荧光双染色鉴定HUVECs发生间质转分化;RT-PCR检测miR-328表达水平;Western blot检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白,p-MEK1/2、p-ERK1/2表达水平。结果:1.免疫荧光双染色结果显示,经高糖处理的HUVECs呈CD31、α-SMA染色双阳性;2.与正常葡萄糖组相比,高糖组miR-328表达明显增高(p0.05),差异具有统计学意义;与高糖组及miR-328组相比,经U0126处理后miR-328表达明显降低(p0.05),差异有统计学意义;3.与正常葡萄糖组相比,高糖及miR-328处理的HUVECsⅠ、Ⅲ型胶原蛋白表达明显增多(p0.05),差异具有统计学意义;与高糖组相比,antagomiR-328组Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达明显减少(p0.05),差异具有统计学意义;与高糖组及miR-328组相比,经U0126处理后Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达明显减少(p0.05),差异具有统计学意义;4.与正常葡萄糖组相比,高糖及miR-328处理的HUVECs,p-MEK1/2、p-ERK1/2表达水平明显增高(p0.05),差异具有统计学意义;与高糖组相比,经antagomiR-328处理的HUVECs,p-MEK1/2、p-ERK1/2表达水平明显降低(p0.05),差异具有统计学意义,经过U0126处理后p-MEK1/2、p-ERK1/2水平较高糖组明显降低(p0.05),差异具有统计学意义。结论:(1)高糖可诱导HUVECs发生间质转分化,同时miR-328表达增高;(2)过表达miR-328可诱导HUVECs发生间质转分化,而antagomiR-328可抑制内皮细胞间质转分化;(3)miR-328诱导HUVECs间质转分化和MEK1/2-ERK1/2信号通路有关。
【关键词】：人脐静脉内皮细胞 高糖 miR-328 内皮细胞间质转分化 MEK1/2-ERK1/2
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.2;R542.2
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文缩略词表9-10
• 第1章 引言10-12
• 第2章 材料与方法12-24
• 2.1 实验材料12-13
• 2.1.1 人脐静脉内皮细胞（HUVECs）12
• 2.1.2 主要试剂和药品12
• 2.1.3 主要实验仪器12-13
• 2.2 实验方法13-23
• 2.2.1 实验器材准备13-14
• 2.2.2 主要试剂的配制14-15
• 2.2.3 HUVECs体外培养15-16
• 2.2.4 实验分组16-17
• 2.2.5 慢病毒感染实验17
• 2.2.6 免疫荧光双染色鉴定HUVECs间质转分化17-18
• 2.2.7 qRT-PCR检测miR-328表达18-20
• 2.2.8 Western blot检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、p-MEK1/2、p-ERK1/2 表达20-23
• 2.3 统计学方法23-24
• 第3章 结果24-31
• 3.1 HUVECs的生长特点24
• 3.2 慢病毒感染HUVECs结果24-25
• 3.3 免疫荧光双染色鉴定HUVECs间质转分化情况25-26
• 3.4 各组细胞miR-328相对表达量比较26-28
• 3.5 Western blot检测各组细胞ⅠⅢ型胶原蛋白相对表达量比较28-29
• 3.6 Western blot检测各组细胞p-MEK1/2、p-ERK1/2 相对表达量比较29-31
• 第4章 讨论31-37
• 4.1 心肌纤维化与糖尿病心肌病31-32
• 4.2 内皮细胞间质转分化与心肌纤维化32-33
• 4.3 miR-328与内皮细胞间质转分化33-34
• 4.4 MEK1/2-ERK1/2 信号通路与内皮细胞间质转分化34-37
• 第5章 结论与展望37-38
• 5.1 结论37
• 5.2 展望37-38
• 致谢38-39
• 参考文献39-43
• 综述 miR-328在心血管疾病中研究的进展43-54
• 参考文献51-54

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1 苏震,郑法雷,李艳,段琳;转化生长因子-β1和表皮生长因子在诱导人肾小管上皮细胞转分化中的作用[J];中华检验医学杂志;2002年05期

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本文编号：433010