一个新的MPL基因异常剪接体MPLL391-V392ins12的鉴定及在骨髓增殖性肿瘤中的突变分析

发布时间：2017-06-28 01:18

  本文关键词：一个新的MPL基因异常剪接体MPLL391-V392ins12的鉴定及在骨髓增殖性肿瘤中的突变分析，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:以不同方法对新发现的MPLL391-V392ins12异常剪接体进行鉴定,以证实其真实存在性;在骨髓增殖性肿瘤(MPN)患者中分析其突变发生情况,并与JAK2V617F、MPLexon10、CALR突变的患者比较来探讨其临床意义。方法:1、MPLL391-V392ins12剪接体的鉴定对目的RNA进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),扩增MPL基因CDS序列,凝胶回收扩增产物,酶切后连接到T-载体中,转化DH5a感受态细胞,涂板,挑取菌落,碱性裂解法提取质粒,测序鉴定。针对剪接体的序列在不同位置设计引物进行PCR扩增,两对引物的扩增产物分别经聚丙烯酰胺凝胶和琼脂糖凝胶电泳,用凝胶成像仪对电泳结果进行扫描分析。2、MPLL391-V392ins12剪接体在MPN中突变情况分析收集MPN患者、正常人、其他血液肿瘤的骨髓或外周血标本,以及实体瘤细胞株,提取基因组总RNA,将总RNA逆转录为c DNA;对c DNA进行等位基因特异性聚合酶链反应(AS-PCR)扩增,经琼脂糖凝胶电泳进行结果分析,检测其在PV、ET、PMF中的突变情况。收集仅携带单一突变MPLL391-V392ins12、JAK2V617F、MPLexon10、CALR阳性的ET、PMF患者的实验室检查指标,分别两两进行统计学比较分析。结果:1、通过克隆测序,发现MPL基因存在一种新的转录产物,即MPL基因的第7和8外显子之间保留了36bp的内含子序列,导致蛋白编码序列氨基酸位点391与392之间插入12个氨基酸(谷、甘、亮、赖、亮、亮、脯、丙、天冬、异亮、脯、缬),故命名为MPLL391-V392ins12。根据MPLL391-V392ins12剪接体的序列设计不同引物进行PCR扩增,结果均得到该剪接体产物,说明了MPLL391-V392ins12的真实存在性。2、248例MPN患者中检测到19例存在MPLL391-V392ins12突变(总突变率7.66%),其中PV 1例,突变率1.92%(1/52);ET 14例,突变率9.66%(14/145);PMF 4例,突变率7.84%(4/51);200例正常人群中未检测到突变;71例CML患者中检测到2例为阳性,其余肿瘤中均未检测到该剪接体。3、MPLL391-V392ins1突变和MPLexon10突变的ET患者性别、年龄、白细胞计数、血小板计数及血红蛋白差异均无统计学意义(P值均0.05);MPLL391-V392ins12突变的ET患者年龄、白细胞计数低于JAK2V617F突变患者(P0.05),血小板计数低于CALR突变患者(P0.05);MPLexon10突变的ET患者年龄、白细胞计数及血红蛋白低于JAK2V617F突变患者(P0.05),血红蛋白低于CALR突变患者(P0.05);JAK2V617F突变的ET患者白细胞计数、血红蛋白高于CALR突变患者(P0.05)。MPLL391-V392ins12突变的PMF患者年龄小于JAK2V617F突变患者(P0.05);JAK2V617F突变的PMF患者白细胞计数高于CALR突变患者(P0.05)。结论:1、本研究发现了MPL基因一个新的异常剪接体MPLL391-V392ins12,经查阅文献,目前尚无报道。病例筛查进一步证实MPLL391-V392ins12剪接体在三种经典MPN中均可发生突变,且主要见于ET、PMF,可能是MPN发病的潜在原因之一。2、ET患者中,MPLL391-V392ins12突变组呈现与JAK2V617F突变组和CALR突变组较为不同的实验室特征,而与MPL exon10突变组则较为相似,提示MPLL391-V392ins12突变在MPN的发病过程中可能发挥与MPLexon10突变类似的作用。
【关键词】：骨髓增殖性肿瘤 MPL基因 异常剪接 MPLL391-V392ins12
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R551.3
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 常用缩写词中英文对照表10-11
• 前言11-13
• 1 研究对象与方法13-22
• 1.1 研究对象13
• 1.2 主要试剂13-14
• 1.3 主要仪器14
• 1.4 主要试剂配制14-15
• 1.5 实验方法和步骤15-20
• 1.6 收集病例20-21
• 1.7 统计学处理21-22
• 2 结果22-26
• 2.1 MPLL391-V392ins12 剪接体的鉴定22-23
• 2.2 MPLL391-V392ins12 剪接体与MPN的关系23-26
• 3 讨论26-29
• 4 结论29-30
• 参考文献30-34
• 综述34-48
• 参考文献42-48
• 致谢48-49
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果49-50
• 个人简介50

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本文编号：492004