DFMG调控氧化损伤VECs TLR4表达对VSMCs增殖与迁移的影响
本文关键词：DFMG调控氧化损伤VECs TLR4表达对VSMCs增殖与迁移的影响，，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：目的:观察一种活性新化学实体,7-二氟亚甲基-5,4-二甲氧基异黄素(7-difluoromethoxy-5,4’-dimethoxygenistein,DFMG)能否通过调控损伤内皮细胞(vascular endothelial cells,VECs)TLR4表达干预共培养模型中平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)的增殖和迁移。方法:(1)用Transwell法建立VECs-VSMCs共培养模型,用LPC诱导VECs的损伤。采用CCK-8法和Transwell迁移法测定不同浓度的LPC诱导的VECs的损伤对VSMCs的增殖和迁移的影响。应用ELISA法分析不同浓度的LPC诱导的损伤VECs与VSMCs共培养模型中VECs IL-6和TNF-α的表达量。采用Western blot和荧光定量PCR测定损伤VECs与VSMCs共培养模型中VECs TLR4在蛋白水平和基因水平的表达。(2)采用CCK-8法测定不同浓度和不同作用时间的DFMG能否干预损伤VECs与VSMCs的共培养模型中VSMCs的增殖。并且,运用TLR4过表达和TLR4沉默的转染技术,采用CCK8法和Transwell迁移法测定DFMG能否通过抑制VECs TLR4的表达干预共培养模型中VSMCs的增殖和迁移。结果:(1)随着LPC浓度的增加,LPC诱导的VECs损伤引起VSMCs增殖和迁移的效应增强;(2)随着LPC浓度的增加,LPC诱导的损伤VECs与VSMCs共培养模型中VECs的TNF-α和IL-6的分泌增加,并且选取30μM作为LPC诱导的共培养模型的最佳浓度;(3)LPC诱导的损伤VECs与VSMCs共培养模型中损伤VECs的TLR4在蛋白水平和基因水平的表达均增高;(4)DFMG抑制损伤VECs与VSMCs共培养模型中VSMCs的增殖,其干预作用呈现一定的时间-浓度依赖特性;(5)TLR4过表达具有与LPC类似的作用,能够促进共培养模型中VSMCs的增殖与迁移;而DFMG与TLR4沉默也有类似的作用,能够抑制共培养模型中VSMCs的增殖与迁移。结论:(1)LPC诱导的VECs损伤可以引起VSMCs的增殖和迁移;(2)DFMG可能是通过调控VECs TLR4的表达干预损伤VECs对VSMCs增殖和迁移的促进作用。
【关键词】：内皮细胞 平滑肌细胞 动脉粥样硬化 共培养 7-二氟亚甲基-5 4-二甲氧基异黄素
【学位授予单位】：湖南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R543.5
【目录】：
- 摘要4-6
- ABSTRACT6-11
- 引言11-14
- 第一部分 损伤VECs对VSMCs的增殖与迁移的影响14-38
- 1.1 材料与试剂14-16
- 1.1.1 细胞14
- 1.1.2 试剂14-15
- 1.1.3 仪器15
- 1.1.4 其它15-16
- 1.2 实验方法16-29
- 1.2.1 试剂的配置16
- 1.2.2 氧化损伤VECs-VSMCs共培养模型的制备16-20
- 1.2.3 实验线路图20
- 1.2.4 CCK-8 法检测细胞活力20-21
- 1.2.5 Transwell迁移法检测细胞迁移能力21-22
- 1.2.6 ELISA法检测VECs TNF-α和IL-6 的分泌量22-24
- 1.2.7 Western blot法检测VECs中TLR4蛋白水平的表达24-26
- 1.2.8 实时定量PCR检测VECs中TLR4基因水平的表达26-28
- 1.2.9 统计学分析28-29
- 1.3 结果29-35
- 1.3.1 损伤VECs对VSMCs的增殖的影响29-30
- 1.3.2 损伤VECs对VSMCs的迁移的影响30-31
- 1.3.3 共培养条件下损伤VECs TNF-α和IL-6 的分泌量31-33
- 1.3.4 共培养模型中损伤VECs TLR4的表达33-35
- 1.4 讨论35-37
- 1.5 结论37-38
- 第二部分 DFMG调控氧化损伤VECs TLR4表达对VSMCs增殖与迁移的影响38-54
- 2.1 材料与试剂38
- 2.1.1 细胞38
- 2.1.2 试剂38
- 2.1.3 仪器38
- 2.1.4 其它38
- 2.2 实验方法38-44
- 2.2.1 TLR4过表达质粒的转染38-39
- 2.2.2 TLR4沉默质粒的转染39-41
- 2.2.3 氧化损伤VECs-VSMCs共培养模型的制备41
- 2.2.4 CCK-8 法检测细胞活力41-43
- 2.2.5 Transwell迁移法检测细胞迁移能力43
- 2.2.6 实验线路图43-44
- 2.2.7 统计学分析44
- 2.3 结果44-51
- 2.3.1 DFMG对损伤VECs与VSMCs共培养模型中VSMCs增殖的影响44-46
- 2.3.2 DFMG对VECs TLR4过表达共培养模型中VSMCs增殖和迁移的影响46-48
- 2.3.3 DFMG对VECs TLR4沉默共培养模型中VSMCs增殖和迁移的影响48-51
- 2.4 讨论51-53
- 2.5 结论53-54
- 参考文献54-60
- 综述60-71
- 参考文献66-71
- 英文缩写词表71-72
- 攻读硕士学位期间的主要成果72-73
- 致谢73-74
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本文关键词：DFMG调控氧化损伤VECs TLR4表达对VSMCs增殖与迁移的影响，由笔耕文化传播整理发布。
本文编号：496155
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