接头蛋白Gab1通过PI3K-AKT信号通路调节bFGF诱导的血管生成

发布时间：2017-07-01 09:19

  本文关键词：接头蛋白Gab1通过PI3K-AKT信号通路调节bFGF诱导的血管生成，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的探讨生长因子受体结合蛋白2相关的接头蛋白1(Gab1)在碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)诱导的血管内皮细胞形成新生血管过程中的作用及分子机制,为周围动脉闭塞性疾病的基因治疗提供实验依据。方法利用小干扰RNA-慢病毒载体技术转染人脐静脉血管内皮细胞融合株(Eahy926)细胞,特异干扰Eahy926细胞Gab1基因,并通过实时荧光定量PCR和蛋白电泳的方法验证所构建的LV-Gab1-si RNA载体能否成功干扰Eahy926细胞Gab1蛋白的表达。Western blot检测p AKT、AKT的表达量确定b FGF作用于Eahy926细胞的最佳刺激浓度和时间。基质胶小管形成实验直观观察接头蛋白Gab1对b FGF诱导Eahy926细胞形成血管状结构的影响,进一步通过蛋白电泳检测细胞增殖与分化下游信号通路蛋白p Gab1、AKT、p AKT等蛋白的表达情况,研究其信号通路转导机制。结果①Western blot结果显示在b FGF终浓度为30ng/ml时Eahy926细胞p AKT蛋白条带最清楚,与其他浓度组相比,AKT活化百分数最高。②Western blot结果显示在b FGF终浓度为30ng/ml、刺激时间为30min时Eahy926细胞p AKT蛋白条带最清楚,与其他刺激时间组相比,AKT活化百分数最高。③在倒置荧光显微镜下对比荧光视野和明视野表明在MOI值为100时,Eahy926细胞高表达绿色荧光蛋白。④实时荧光定量PCR结果显示Gab1 si RNA组Eahy926细胞Gab1 m RNAs表达明显减少。⑤基质胶小管形成实验结果表明Gab1 si RNA组Eahy926细胞小管形成长度明显较短,且所形成的网状结构简单且多不完整。⑥Western blot检测下游信号通路蛋白分子结果示:Gab1si RNA组p AKT条带明显较模糊,AKT活化百分数明显降低。结论①体外b FGF刺激Eahy926细胞形成血管的最佳浓度和时间分别为30ng/ml、30min。②构建的特异性LV-Gab1-si RNA载体在MOI值为100时能够有效地转染Eahy926细胞,敲除Gab1基因,干扰接头蛋白Gab1的表达。③接头蛋白Gab1参与b FGF诱导Eahy926细胞在基质胶中形成新生血管。④接头蛋白Gab1调节b FGF诱导的血管形成通过增加P85、p AKT蛋白的表达。
【关键词】：血管生成 生长因子受体结合蛋白2相关的接头蛋白1 碱性成纤维细胞生长因子 小干扰RNA 周围动脉硬化闭塞性疾病
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R543.5
【目录】：

• 主要英文缩略词表3-4
• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-8
• 前言8-10
• 材料与方法10-25
• 结果25-31
• 讨论31-35
• 结论35-36
• 参考文献36-40
• 综述40-50
• 参考文献47-50
• 致谢50-51
• 硕士期间论文发表情况51

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1 李文献;接头蛋白Gab1通过PI3K-AKT信号通路调节bFGF诱导的血管生成[D];福建医科大学;2015年

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本文编号：505383