遗传性抗凝蛋白缺陷症致静脉血栓栓塞症的分子机制研究

发布时间：2017-07-27 03:05

  本文关键词：遗传性抗凝蛋白缺陷症致静脉血栓栓塞症的分子机制研究

  更多相关文章： 抗凝蛋白 基因缺陷 遗传性 静脉血栓 静脉血栓 错义突变 抗凝蛋白C 抗凝蛋白C缺陷症 静脉血栓 无义突变 抗凝蛋白S 抗凝蛋白s缺陷症

【摘要】：第一部分遗传性抗凝蛋白缺陷症在VTE人群中的发病率目的:探讨抗凝蛋白缺乏率和遗传性抗凝蛋白缺陷症在VTE人群中的发病率方法:收集277例临床上急慢性VTE患者的外周血。分别采用凝固法和发色底物法检测两组的抗凝蛋白活性(Antithrombin activity,AT:A;Protein S activity,PS:A;Protein C activity,PC:A)。对抗凝蛋白活性较低者进行外周血基因测序分析,发现对蛋白结构有影响的基因突变。用统计学方法计算出全部VTE患者中三种抗凝蛋白缺乏率和相应的基因缺陷率。结果:277例VTE病例中发现:AT、PC、PS活性缺乏率分别为16.00%、17.45%、17.09%,遗传性抗凝蛋白缺陷症(Antithrombin deficiency,HACPD)发生率分别为ATD1.5%、PCD6.2%、PSD0.7%。结论:VTE患者与正常人相比,三种抗凝蛋白活性缺乏率和基因缺陷率都明显高出10倍以上,说明HACPD是VTE发病的高危因素。第二部分新杂合点错义突变致遗传性抗凝蛋白c缺陷症的分子机制研究目的:探讨新杂合点突变致遗传性抗凝蛋白c缺陷症的分子机制方法:分析一临床血栓病例,抽提外周血DNA并做PCR扩增及核酸序列分析,构建野生型质粒(PC wt)和突变型质粒(PC-c.1157 TC),将质粒瞬时转染入hek-293t细胞内进行体外表达,rt-PCR观察突变pc在转录水平的变化,western blot印迹检测质粒转染后细胞裂解液中PC抗原以及细胞外液分泌的PC含量,细胞免疫荧光染色检测PC在细胞内的分布情况。结果:细胞免疫荧光验证质粒成功转染入HEK-293T细胞,rt-pcr:突变型质粒的m RNA水平显著高于野生型;western印迹检测:PC-c.1157 TC质粒转染细胞裂解液中PC蛋白和PC wt质粒转染细胞间没有显著性差异,突变型质粒蛋白表达有上调趋势;细胞外液中野生型质粒转染细胞分泌的PC多于突变型,差异有统计学意义;激光共聚焦示:PC突变体质粒转染细胞表达的目的蛋白在内质网中聚集明显增加。结论:新杂合错义突变致遗传性抗凝蛋白C缺陷症的分子机制为PC在内质网内滞留,导致胞外PC分泌量减少,活性降低。第三部分新发无义突变致抗凝蛋白S缺陷症的分子机制研究目的:探讨新杂合点突变致遗传性抗凝蛋白S(Protein S,PS)缺陷症的分子机制。方法:分析一临床血栓病例并做家系调查,抽提外周血DNA并做PCR扩增及核酸序列分析,构建野生型质粒(PS wt)和突变型质粒(PS-c.1771 del A),将质粒瞬时转染hek-293t细胞,rt-PCR观察突变PS在转录水平的变化,western blot检测质粒转染后细胞裂解液中PS的表达量,Elisa检测观察质粒转染细胞外液分泌的PS含量,细胞免疫荧光染色检测PS在高尔基体内的分布情况。结果:在PROS1基因上发现一新发的无义突变PS-c.1771 del A,家系调查显示本研究病例为一遗传性抗凝蛋白S缺陷症家系,野生型质粒转染细胞裂解液中m RNA和PS的表达量显著高于突变型质粒转染细胞,Elisa检测到野生型质粒转染细胞外液分泌的PS显著多于突变型,激光共聚焦也进一步显示突变型质粒转染细胞的PS表达量明显少于野生型,突变质粒内的PS在高尔基体内的聚集明显少于野生型质粒表达蛋白。结论:本病例先证者患遗传性抗凝蛋白S缺陷症的分子机制可能是由于突变导致PS表达下降、分泌障碍,而后抗凝功能减弱,血栓形成风险增加。
【关键词】：抗凝蛋白 基因缺陷 遗传性 静脉血栓 静脉血栓 错义突变 抗凝蛋白C 抗凝蛋白C缺陷症 静脉血栓 无义突变 抗凝蛋白S 抗凝蛋白s缺陷症
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R543.6
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 中英文缩略词对照表9-11
• 绪论11-13
• 第一部分 遗传性抗凝蛋白缺陷症在VTE人群中的发病率13-21
• 对象与方法13-17
• 结果17-19
• 讨论19-21
• 第二部分 新杂合点错义突变致遗传性抗凝蛋白c缺陷症的分子机制研究21-39
• 对象与方法21-33
• 结果33-37
• 讨论37-39
• 第三部分 新发无义突变致抗凝蛋白S缺陷症的分子机制研究39-58
• 材料与方法39-46
• 实验结果46-56
• 讨论56-58
• 结论58-59
• 参考文献59-64
• 附录64-65
• 致谢65-67
• 学术论文和科研成果目录67

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本文编号：579496