高表达Peroxiredoxin-2对DOCA-Salt高血压小鼠心肌肥大和心功能不足的保护作用

发布时间：2017-08-19 16:38

  本文关键词：高表达Peroxiredoxin-2对DOCA-Salt高血压小鼠心肌肥大和心功能不足的保护作用

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【摘要】：目的Peroxiredoxin-2(Prx-2)是一种新型过氧化物酶,本研究通过慢病毒转染诱导心脏Prx-2高表达,并通过观察DOCA-Salt诱导高血压小鼠的收缩压、心肌肥大、Ⅰ和Ⅲ型胶原、心功能、细胞凋亡、活性氧等指标在心脏中的变化,探讨Prx-2对DOCA-Salt高血压诱导的心脏重塑和心功能的影响,为Prx-2成为防治高血压心脏病的新靶点提供实验依据。方法随机将8周大的雄性C57BL/6的小鼠划为6组:对照组(n=10)、对照+空载转染组(n=9,空载病毒)对照+Prx-2转染组(n=10,携带有目的基因慢病毒)、DOCA组(n=9)、DOCA+空载转染组(n=10)、DOCA+Prx-2转染组(n=12)。对照+空载转染组、对照+Prx-2转染组、DOCA+空载转染组、DOCA+Prx-2转染组的小鼠在制备DOCA-Salt模型前2周,将Peroxiredoxin-2的慢病毒或空载体的慢病毒用显微注射的方法转染至左心室壁组织。周后进行DOCA-Salt模型的制备,小鼠切除左肾,并在术后1周DOCA组、DOCA+空载转染组及DOCA+Prx-2转染组皮下注射DOCA,同时饮用1%Na Cl和0.2%KCl;而对应的对照组的小鼠自由则饮水进食。鼠尾动脉袖套法测量收缩压。12周末单压力导管检测左室压力最大上升速率(dp/dt_(max),代表着心肌收缩能力指标)、左室压力最大上升速率与心室内压比值(dp/dt_(max)/ip,代表着心肌收缩能力指标)和左室压力最大下降速率(dp/dt_(min),代表着心肌舒张能力指标),及给予异丙肾上腺素前后dp/dt_(max)、dp/dt_(max)/ip和dp/dt_(min)差值((?),心肌贮备能力指标);免疫荧光法检测8-OHd G的表达(DNA过氧化产物);免疫印记法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维蛋白、Prx-2蛋白、ASK1、p-ASK1、p38及p-p38的表达;Tunel检测心肌细胞凋亡情况;分光光度法检测Caspase-3酶活性的高低。结果1慢病毒转染14天后,prx-2转染组的Peroxiredoxin-2蛋白表达水平较转染对照明显升高(P0.01)。2与对照组比较,DOCA组的收缩压、全心质量指数、左心室质量指数、I和III型胶原、8-OHd G、凋亡指数、p-p38及p-ASK1表达水平、Caspase-3酶活性均明显增高(P0.05),而(?)dp/dt_(max)、(?)dp/dt_(max)/ip、(?)dp/dt_(min)无明显变化;DOCA组和DOCA+空载转染组的SBP、全心质量指数、左心室质量指数、I和III型胶原、8-OHd G、凋亡指数、p-p38及p-ASK1表达水平、Caspase-3酶活性差异无统计学意义(P0.05)DOCA+空载转染组比较,DOCA+Prx-2转染组SBP、全心质量指数、左心室质量指数的差异无统计学意义(P0.05),但(?)dp/dt_(max)、(?)dp/dt_(max)/ip显著增高,(?)dp/dt_(min)、I和III型胶原、8-OHd G、p-p38及p-ASK1表达水平、Caspase-3酶活性及凋亡指数明显下降(P0.01)。3与对照组比较,假手术+Prx-2转染组和DOCA组Peroxiredoxin-2的蛋白表达水平增高(P0.05);DOCA组和DOCA+空载转染组的Peroxiredoxin-2的蛋白表达水平无明显差异(P0.05);较DOCA+空载转染组相比,DOCA+Prx-2转染组的Peroxiredoxin-2蛋白增高(P0.05)。结论1 Peroxiredoxin-2高表达对DOCA-Salt诱导的血压增高和心肌肥大无明显作用;2 Peroxiredoxin-2高表达可以通过降低活性氧水平来抑制心脏纤维化和心肌凋亡,从而提升心脏贮备功能;3 ASK1/p38/Caspase-3通路在活性氧抑制心肌细胞凋亡的过程中发挥了重要作用。
【关键词】：高血压 心功能 活性氧 Prx-2蛋白
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R54
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文缩略表10-11
• 引言11-13
• 第1章 实验研究13-48
• 1.1 材料与方法13-24
• 1.1.1 实验动物13
• 1.1.2 实验材料13-14
• 1.1.3 实验试剂14-15
• 1.1.4 常用试剂的配制15-17
• 1.1.5 实验方法17-24
• 1.2 结果24-35
• 1.2.1 Peroxiredoxin-2 慢病毒转染2周 后心脏后心肌组织中Peroxiredoxin-2 蛋白表达24-25
• 1.2.2 收缩压25-26
• 1.2.3 体重及心脏重量26-27
• 1.2.4 I和III型胶原的表达27-29
• 1.2.5 心贮备功能29-30
• 1.2.6 心肌组织凋亡30-31
• 1.2.7 Caspase -3 酶活性水平31-32
• 1.2.8 p-ASK1和p-p38表达情况32-33
• 1.2.9 8-OHdG水平33-34
• 1.2.10 Peroxiredoxin-2 蛋白表达34-35
• 1.3 讨论35-43
• 1.3.1 高血压及DOCA-Salt模型的制备35-36
• 1.3.2 高血压诱导心脏重塑与ROS的作用36-40
• 1.3.3 Peroxiredoxin-2 蛋白及其抗氧化机制与作用40-43
• 1.4 小结43-44
• 参考文献44-48
• 第2章 综述 盐敏感型高血压的发病机制及Peroxiredoxin-2 蛋白对心脏的保护作用48-57
• 2.1 高血压简介48-49
• 2.2 盐敏感型高血压发病机制49-51
• 2.2.1 钠离子转运机制49
• 2.2.2 肾素-血管紧张素-醛固酮系统49-50
• 2.2.3 交感神经活性增强50
• 2.2.4 肾脏排钠损伤及炎症反应50
• 2.2.5 内皮功能受损50-51
• 2.2.6 内分泌机制51
• 2.3 Peroxiredoxin-2 （prx-2）蛋白及其生理机制简介51-53
• 2.3.1 Peroxiredoxin-2 抗氧化功能及机制52
• 2.3.2 Peroxiredoxin-2 抑制细胞凋亡52
• 2.3.3 Peroxiredoxin-2 参与细胞的信号传导52-53
• 2.4 Peroxiredoxin-2 （prx-2）蛋白对心血管的保护作用53-54
• 参考文献54-57
• 结论57-58
• 致谢58-59
• 导师简介59-60
• 作者简介60-61
• 学位论文数据集61

【参考文献】

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本文编号：701808