SRB1、ITGB2基因单核苷酸多态性与冠心病的相关性研究

发布时间：2017-08-22 03:24

  本文关键词：SRB1、ITGB2基因单核苷酸多态性与冠心病的相关性研究

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【摘要】：背景：冠心病是一种由环境因素和遗传因素共同作用导致的复杂疾病,是世界范围内死亡和致残的首要原因之一。脂代谢异常和炎症是冠心病发生、发展的两大机制,也是近年来冠心病研究的热点。B类1型清道夫受体(scavenger receptor class B type1,SRB1)是最主要的高密度脂蛋白(HDL)受体,既能介导肝脏对高密度脂蛋白中胆固醇脂的选择性摄取,又能促进外周组织细胞内游离胆固醇转运至HDL,从而保持胆固醇代谢的平衡并防止游离胆固醇在动脉壁中堆积。SRB2的缺失可导致动脉壁内胆固醇平衡紊乱以及脂质在动脉壁大量沉积和动脉硬化症的发生。炎症是动脉粥样硬化性疾病发病的另一重要机制,炎症反应中白细胞的粘附、趋化等过程的基础是细胞黏附和黏附分子的作用。整合素β2 (ITGB2, integrin beta 2),即CD18,是黏附分子中整合素家族的重要成员。在前期的差异蛋白质组学研究中,我们发现,冠心病患者心外膜脂肪组织中ITGB2在表达水平较非冠心病患者明显上调(1.6倍),而在相应的皮下脂肪组织中的表达水平确明显下调(0.1倍)。提示ITGB2可能通过参与炎症细胞与内皮细胞之间的粘附、炎症细胞趋化等过程,从而在动脉粥样硬化形成的起始阶段发挥作用。冠心病是一种复杂的多基因遗传病,从遗传学的角度研究冠心病的发病机制,可能为冠心病提供一种新的诊疗手段。目的：本研究的目的在于,对中国北方汉族人群SRB1和ITGB2基因的单核苷酸多态性(SNP)进行分析,探讨这两个基因SNPs位点的等位基因频率、基因型频率与冠心病发病的相关性；同时探索SNPs位点与研究对象的糖、脂代谢指标的相关性。为阐明冠心病的遗传机制、评估冠心病的病变程度和预后提供新的指标。方法：1、研究对象研究对象来自北京协和医院心内科冠心病研究数据库,所有研究对象均于我院行冠状动脉造影检查,并进行了详细的病史采集和血生化指标收集。根据我院冠状动脉造影检查结果进行诊断,左主干、右冠、左前降支、左回旋支中有一支以上狭窄≥50%诊断为冠心病。根据冠脉造影结果进行分组,冠状动脉造影结果证实本研究入选以上血管狭窄≥75%患者为冠心病组,冠状动脉造影结果未见异常或狭窄25%作为非冠心病组。从冠心病研究数据库中筛选出性别、年龄、BMI、糖尿病患者比例、血脂异常患者比例能够匹配的患者作为研究对象。2、筛选SNPs位点(1)在haploview中挑选基因的标签SNP,选择其中位于基因功能区(如启动子区、外显子区、3'UTR或5'UTR)的SNPs位点,之后在Hapmap中查找目标SNP在中国人群中的MAF值(最小等位基因频率),以MAF大于0.05为原则；(2)依据全基因组关联研究(GWAS)结果及国内外文献报道,筛选曾经报道过阳性结果或趋势的SNPs位点。3、SNP检测方法使用oMEGA公司提供的全血基因组DNA提取试剂盒提取DNA,通过琼脂糖凝胶电泳进行DNA质检,之后利用Sequenom MassARRAY SNP检测平台进行检测。检测过程主要包括引物设计及合成、PCR扩增反应、SAP纯化反应、单碱基延伸反应、质谱检测(基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱)分析,检测结果使用TYPER 4.0软件(sequenom)分型并输出结果。4、统计分析方法基因型频率分布的Hardy. Weinberg平衡(HWE)检验、最小等位基因频率(Minor allele frequency, MAF)、 "病例-对照”关联研究数据分析应用Plink软件；不同基因型间计量数据的比较应用SPSS17.0,其中连续变量使用单因素方差分析,分类变量使用卡方分析；单体型分析应用Haploview 4.0软件,P0.05认为统计学有显著性差异。结果：1、一般临床资料冠心病组496例,其中男性256人,女性244人,平均年龄为60.19±9.8岁。正常对照组367例,其中男性181人,女性186人,平均年龄为59.39±11.00岁。两组之间性别、年龄、BMI、糖尿病患者比例、血脂异常患者比例无显著性差异。2、Hardy-Weinberg平衡检验SRB1基因的三个SNP位点 rs838880、rs5888、rs5889和ITGB2基因的三个SNP位点rs235326、rs2070947、rs2070946均符合Hardy-Weinberg平衡,样本具有较好的代表性。3、SNPs位点的“病例-对照”关联分析分别对SRB1基因的三个SNP位点rs838880、rs5888、rs5889 和 ITGB2基因的三个SNP位点rs235326、rs2070947、rs2070946的等位基因频率、基因型频率在冠心病组和非冠心病组进行差异性检验,并通过基因模型模拟进行分析。SRB1基因rs838880位点(C/T)等位基因频率和基因型频率在两组间统计学有显著性差异,P值分别为0.017、0.0028。通过基因模型模拟,当等位基因C为隐性遗传时,即基因型为CC型时,与另外两种基因型(CT型+∏型)相比,两组之间的基因型频率统计学有显著性差异,P值为0.000672。在冠心病组与非冠心病组间SNPs位点隐性模型的关联分析中,ITGB2基因的rs2070947位点(GG vs CA+AA)在两组间统计学有显著性差异(p=0.03),基因型为GG型的人群冠心病的发生率为73%,而基因型为GA或AA时,冠心病的发生率为56%。4、不同基因型间计量和计数资料的比较对上述SNPs位点三个基因型间临床及血清代谢指标进行比较,SRB1基因rs5888位点三个基因型(AA型、AG型、GG型)间,血脂异常病史、LPA差异有统计学意义(P值均为0.03),三种基因型中,AA型有高脂血症病史的人数明显少于另外两种基因型,AA型LPA水平明显低于另外两种基因型。ITGB2基因rs235236位点三个基因型(AA型、AG型、GG型)间,高血压病史、HDL、APOA1统计学有显著性差异,AA型HDL水平高于另外两种基因型,AG型APOA1水平低于另外两种基因型。ITGB2基因rs2070947位点三个基因型(GG型、GA型、AA型)间,TG统计学有显著性差异(P=0.01),GA型TG水平明显高于另外两组。rs2070946位点三个基因型(CC型、CT型、TT型)间,APOA1、hsCR P统计学有显著性差异(P值分别为0.01、0.02)。CT型APOA1及hsCRP的水平均明显高于另外两个基因型的人群。结论：SRB1基因的rs838880位点(C/T)与冠心病的发生有相关性,基因型为CC型的人群相对于具有其他两种基因型的人群,其冠心病的发生风险明显降低,C等位基因可能对冠心病的发病起保护作用。SRB1基因rs5888位点与脂质代谢有关,A等位基因可能对脂代谢异常起保护作用。ITGB2基因的rs2070947位点,基因型为GG型的人群冠心病的发生率为(73%)明显高于基因型为GA或AA型(56%)GG基因型可能是冠心病发病的危险因素。ITGB2基因rs2070946位点基因型为CT型的人群hsCRP水平升高,CT基因型可能为冠心病炎症反应的危险因素。
【关键词】：SRB1基因 ITGB2基因 冠心病 单核苷酸多态性 关联分析
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R541.4
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 缩略词表10-12
• 前言12-14
• 研究对象与方法14-33
• 一、研究对象14-15
• 二、试验与材料15-17
• 三、试验方法17-33
• 实验结果33-48
• 一、研究纳入人群特点33-34
• 二、各SNPs位点Hardy-Weinberg平衡检验34
• 三、SRB1、ITGB2基因上各SNPs位点的“病例-对照”关联分析34-48
• 讨论48-52
• 一、单核苷酸多态性概述48
• 二、研究对象的选取48-49
• 三、SNPs研究的技术方法和统计方法49
• 四、SRB1基因SNPs与冠心病的相关性49-50
• 五、ITGB2基因SNPs与冠心病的相关性50-52
• 结论52-53
• 参考文献53-57
• 文献综述57-67
• 参考文献62-67
• 致谢67

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 张海澄,郭继鸿;冠心病流行病学与一级预防[J];中国实用内科杂志;2002年08期

2 袁瑾,朱健华,潘闽,陈风,龚亚驰,崔之础,魏福祥;血小板内皮细胞黏附分子-1基因Leu125Val分子变异与冠心病相关性[J];天津医药;2004年12期

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本文编号：716773