Corin在动脉粥样硬化中的表达及其作用的初步探讨

发布时间：2017-08-23 02:08

  本文关键词：Corin在动脉粥样硬化中的表达及其作用的初步探讨

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【摘要】：研究背景动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)是冠心病、心梗、中风等众多心脑血管疾病的主要病理基础,控制动脉粥样硬化发生发展是防治这些心脑血管疾病的根本性战略性措施。尽管目前关于动脉粥样硬化的发病机制有多种学说,且许多基因都与其病理过程有关,但作为一个多危险因素综合作用导致的疾病,其确切原因仍不十分清楚。因此进一步探寻动脉粥样硬化相关基因及其在疾病中的作用,将有助于我们采取更加全面综合和有效的方案来预防、治疗与控制疾病。Corin是一种新发现的Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶,主要在心脏表达,通过活化心房利钠肽(心钠肽,atrial natriuretic peptide, ANP),调节血压和心脏功能。Corin基因变异和功能障碍能导致其活性降低,可能与一系列心血管疾病如高血压、心肌肥厚及心力衰竭等的发病相关。新近的研究表明,心肌细胞膜表面已处于活化状态的corin可通过ADAM10酶切介导其脱落进入血液循环中,且脱落释放的可溶性corin片段是保留其活性的,所以心脏表达的corin可能通过这种方式到达其它组织器官局部发挥作用。流行病学研究表明,人血浆中可溶性corin浓度与肥胖、中风、心肌梗死疾病相关,提示corin可能参与了这些疾病的病理过程。但corin与动脉粥样硬化的关系,还未见报道。在本研究中,我们通过体内体外实验,首次对corin在主动脉中的表达及其与动脉粥样硬化的相关性进行探讨,并对其作用及机制进行了初步研究。通过此研究,我们希望明确conn基因与动脉粥样硬化病理过程之间的关系,进一步扩展我们对corin生物活性及作用特点的认识,以及我们对动脉粥样硬化发病机制的认识,进一步为动脉粥样硬化相关疾病的防治提供新的药物作用靶点和思路。实验目的1.检测corin是否在主动脉中表达,并确定其细胞表达定位。2.明确corin与动脉粥样硬化损伤的相关性。3.分别对主动脉内皮细胞表达的corin和循环中由心肌细胞脱落而来的可溶性corin在动脉粥样硬化中的作用及机制进行初步探讨。实验方法1.本研究采用RT-PCR、免疫组化和免疫荧光染色技术,首先确定corin是否在主动脉中表达及其细胞定位。2.体内动物模型建立与分组：体内实验通过给予ApoE-/-小鼠高脂饮食建立体内动脉粥样硬化模型,设为动脉粥样硬化(AS)组,正常饮食C57BL/6小鼠为对照组(WT)。然后采用RT-qPCR、Western blotting、免疫组化等技术检测小鼠主动脉组织和心肌组织中corin及其底物ANP在动脉粥样硬化动物模型中的表达变化,从而明确corin与动脉粥样硬化的相关性。3.体外模型建立与分组：体外培养人脐静脉内皮细胞HUVECs)株,首先通过RT-PCR和免疫组化、免疫荧光确认corin在]HUVECs中是否有表达,为以HUVECs作为体外模型奠定基础。然后通过不同剂量ox-LDL刺激HUVECs,建立体外动脉粥样硬化内皮细胞损伤模型,采用RT-qPCR和细胞免疫荧光技术,检测细胞中corin的表达水平变化。有助于进一步明确corin与动脉粥样硬化的相关性。4. siRNA转染及细胞划痕实验：体外通过小干扰RNA分别沉默内皮细胞和心肌细胞表达的corin,从而体外分别模拟主动脉内皮细胞表达的corin缺失、以及由心脏脱落而来的可溶性corin的缺失,然后通过内皮细胞划痕实验,分别观察这两部分corin的缺失对内皮细胞迁移功能的影响。从而对这两部分corin在动脉粥样硬化中的作用及机制进行初步探讨。实验结果1. Corin在主动脉局部有表达,且主要表达于内皮细胞。2.通过体内动物实验发现,在动脉粥样硬化模型组中,主动脉局部表达的corin-ANP升高,提示主动脉局部的corin可能通过活化ANP,参与动脉粥样硬化过程。而心脏中corin-ANP的表达与正常对照组相比,没有显著差异,但心脏表达的corin有多少能够脱落进入循环到达主动脉局部发挥作用,我们尚未可知,因此对于心肌细胞合成后脱落生成的可溶性corin在动脉粥样硬化中的作用,我们又设计了进一步的体外实验来进行验证。3.体外细胞实验中,首先证实了corin在培养的内皮细胞中的表达,ox-LDL刺激内皮细胞后, 内皮细胞中corin表达升高,并呈现明显剂量依赖性。4.小干扰RNA沉默使内皮细胞表达的corin缺失后,能够抑制内皮细胞的迁移；而使心脏脱落而来的可溶性corin缺失后,也能够抑制内皮细胞的迁移。提示主动脉局部内皮细胞表达的corin以及循环中由心肌细胞合成后脱落生成的可溶性corin都可能通过影响内皮细胞功能,进而参与到动脉粥样硬化病理过程中。实验结论在本研究中,我们首次发现主动脉内皮细胞有corin的表达,并证实了corin-ANP通路与动脉粥样硬化的相关性。此外,首次证实了内皮细胞表达的corin以及由心肌细胞合成后脱落生成的可溶性corin都可能通过影响内皮细胞功能,从而在动脉粥样硬化中发挥潜在的保护作用。
【关键词】：Corin 心钠肽 心血管疾病 动脉粥样硬化 内皮细胞
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R543.5
【目录】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 符号说明13-17
• 前言17-19
• 实验材料19-25
• 实验方法25-37
• 实验结果37-46
• 讨论46-50
• 结论50
• 创新点及局限性50-51
• 参考文献51-54
• 致谢54-55
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文55-56
• 学位论文评阅及答辩情况表56

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3 张s，

本文编号：722359