Klotho基因与大鼠心力衰竭心肌重构的相关性研究

发布时间：2017-08-23 02:11

  本文关键词：Klotho基因与大鼠心力衰竭心肌重构的相关性研究

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【摘要】：目的:探讨重组腺病毒介导的Klotho基因转染对大鼠心力衰竭(心衰)进程以及心肌重构的影响,并探讨其机制。方法:SPF级SD大鼠,随机数表法分为5组,即正常对照组(对照组,未给予任何干预),心衰组(只做心衰模型,不给予其他干预),生理盐水组(在心衰模型的基础上尾静脉注射生理盐水,0.5 ml/只),腺病毒载体介导的增强荧光蛋白组(AD.EGFP组,在心衰模型的基础上用腺病毒载体介导增强荧光蛋白,2×1010 pfu,0.5 ml/只),以及腺病毒载体介导的目的基因组(AD.Klotho组,在心衰模型的基础上用腺病毒载体介导目的基因,2×1010pfu,0.5 ml/只),每组6只。异丙肾上腺素连续腹腔注射法建立大鼠心衰模型。构建重组腺病毒载体pDC316-CMV-EGFP-Klotho,标记为AD.Klotho,并将其转导至相应的心衰大鼠模型。建模第6周,采用超声心动图测定各组大鼠的左心室射血分数(LVEF);多道生理记录仪测定各组大鼠血液动力学变化;检测各组大鼠心肌组织病理学改变;冰冻切片后镜下观察各组大鼠心肌组织荧光蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链反应评估各组大鼠心肌组织中Klotho基因的表达水平,以及心肌纤维化相关因子Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达水平;ELISA法检测各组大鼠血浆中B型利钠肽(BNP)的表达水平。结果:心衰组、生理盐水组、AD.EGFP组和AD.Klotho组大鼠心肌组织苏木素伊红染色可见心肌细胞断裂、心肌间质增生、心肌细胞肥大和结构改变。对照组大鼠心肌组织病理切片未见上述改变。通过比较发现,AD.Klotho组大鼠心肌纤维化程度、重构程度以及心肌细胞肥大程度均较心衰组、生理盐水组和ad.egfp组低。建模第6周,ad.klotho组和ad.egfp组大鼠心肌组织中仍可见egfp绿色荧光表达,而对照组、心衰组和生理盐水组则未可见。各组大鼠心肌组织中klotho、胶原Ⅰa1和Ⅲa1mrna均有表达。其中,对照组和ad.klotho组klothomrna表达水平较高,与其他3组比较差异均具有统计学意义(p均0.05),而心衰组、生理盐水组和ad.egfp组间klothomrna表达水平差异无统计学意义(p均0.05)。心衰组、生理盐水组和ad.egfp组胶原Ⅰa1和Ⅲa1mrna表达水平均较对照组和ad.klotho组高,差异均具有统计学意义(p均0.05),且三组间比较差异无统计学意义(p均0.05)。超声心动图结果示心衰组、生理盐水组、ad.egfp组和ad.klotho组大鼠总体左室射血分数为(42.27±3.22%)低于对照组(72.13±2.97%)(p0.01)。对照组和ad.klotho组hr均高于心衰组、生理盐水组和ad.egfp组(p均0.05)。对照组和ad.klotho组lvsp均高于心衰组、生理盐水组和ad.egfp组(p均0.01)。对照组和ad.klotho组lvedp均低于心衰组、生理盐水组和ad.egfp组(p均0.01)。对照组和ad.klotho组+dp/dtmax均大于心衰组、生理盐水组和ad.egfp组(p均0.05)。对照组和ad.klotho组-dp/dtmax亦均大于心衰组、生理盐水组和ad.egfp组(p均0.05)。心衰组、生理盐水组、ad.egfp组和ad.klotho组大鼠心脏体质量指数分别为(6.50±0.32)、(6.46±0.18)、(6.34±0.15)和(5.23±0.19)g×1000/g均明显高于对照组(2.84±0.25)g×1000/g,(p均0.05),但ad.klotho组又明显低于心衰组、生理盐水组和ad.egfp组(p0.05),心衰组、生理盐水组和ad.egfp组间差异则无统计学意义(p均0.05)。心衰组、生理盐水组、ad.egfp组和ad.klotho组大鼠血清中bnp水平均明显高于模型组(p均0.01),但ad.klotho组明显低于心衰组、生理盐水组和ad.egfp组(p0.05)。结论:腹腔注射异丙肾上腺素可成功建立大鼠心衰模型。klotho基因可抑制心肌纤维化、心肌肥大及胶原纤维增生。
【关键词】：心力衰竭 充血性 心室重构 Klotho基因
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R541.6
【目录】：

• 中文摘要5-8
• ABSTRACT8-11
• 英汉缩略词对照表11-12
• 前言12-14
• 1 材料与方法14-33
• 1.1 实验材料与仪器14-15
• 1.2 主要实验试剂15-16
• 1.3 主要实验仪器16-17
• 1.4 实验方法17-33
• 1.5 统计学分析33
• 2 结果33-45
• 2.1 模型建立33
• 2.2 重组腺病毒治疗 6 周后各组大鼠心脏组织切片病理学 HE 染色33-35
• 2.3 重组腺病毒治疗 6 周后各组大鼠心脏组织绿色荧光分布情况35-36
• 2.4 重组腺病毒转染 HEK293 细胞结果图36-37
• 2.5 重组腺病毒载体的构建37-42
• 2.6 各组大鼠心肺功能的检测结果42
• 2.7 各组大鼠心脏体质量指数的检测结果42-43
• 2.8 大鼠心肌组织中Klotho和Col Ⅰa1和ColⅢa1 mRNA表达水平的检测结果43-44
• 2.9 各组大鼠血清中 BNP 水平的检测结果44-45
• 3 讨论45-47
• 4 结论47-48
• 参考文献48-52
• 综述52-62
• 参考文献58-62
• 攻读学位期间发表的学术论文目录62-63
• 致谢63-64

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