螺旋藻激酶对血管内皮细胞氧化损伤保护作用的研究

发布时间：2017-08-24 22:28

  本文关键词：螺旋藻激酶对血管内皮细胞氧化损伤保护作用的研究

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【摘要】：目的：采用过氧化氢(H202)诱导内皮细胞发生氧化应激的方法,建立人脐静脉内皮细胞(HUVECS)氧化损伤模型,探讨螺旋藻激酶(SPK)对内皮细胞内氧化还原体系的影响,及其对内皮细胞的单层细胞通透性和细胞粘附性的影响,推测螺旋藻激酶与动脉粥样硬化之间的关系。方法：1.体外培养HUVECS,检测不同浓度H202和SPK对HUVECS细胞活力的影响,确定过氧化损伤模型所需H202浓度和药物干预所使用的SPK浓度；2.建立内皮细胞氧化损伤模型并随机分组,按添加药物不同设计为6组：N,正常组；D,损伤组(2mmol.L-1H2O2)；E,阳性组(10μg.ml-1VitE+2mmol.L-1H2O2);L,低剂量组(1mg.ml-1SPK+2mmol.L-1H2O2);M,中剂量组(2mg.ml-1 SPK+2mmol.L-1H2O2);H,高剂量组(3mg.ml-1SPK+2mmol.L-1H2O2)。3.测定单层细胞透过率T,得出H202及SPK对内皮细胞活力的影响及其对单层细胞通透性的影响,收集细胞培养上清液,超声破裂法获得细胞裂解液,用各种呈色反应检测细胞培养液中一氧化氮体系里NO、NOS的含量,氧化还原体系中氧化还原酶SOD.GSH-PX的活性,细胞内MDA、ATP含量,细胞外LDH渗出量,酶联免疫法测各组细胞培养液中ICAM-1的含量。结果：1、不同浓度H202对HUVECS活力的影响与正常组相比,H202浓度为1mmol/L时,对细胞活力的影响微弱并且不随时间变化(P0.05)；H202浓度为2mmol/L时,培养4小时后细胞抑制率超过40%,(P0.05)随着时间延长抑制率增强,呈不可逆的损伤；H202浓度增大到4mmol/L.8mmol/L后,在最初的4小时抑制率即可达到60%以上(P0.01),可见细胞成片脱落,细胞破碎漂浮在培养基表面。2、SPK对HUVECS活性的影响随着SPK浓度增大,其对细胞活力的影响从促进转为抑制。与正常组对比,在SPK浓度达到2mg/ml时细胞活力最大；SPK浓度≥6mg/ml后,对细胞生长呈抑制作用。对比损伤组,中剂量组和高剂量组细胞活力明显上升。3、SPK对氧化损伤内皮细胞的单层细胞通透性的影响与正常组相比,损伤组细胞的单层细胞通过率升高了6倍以上,(362.49 ±26.94 VS 54.81±12.46);而与损伤组比较,阳性组则使通透率减弱了60%以上(133.52±36.61 VS 362.49±26.94),SPK各浓度组对氧化造成的细胞单层通透性增强也表现出明显的抑制作用,且这种作用随药物浓度的增大而增强,(275.13±20.46 VS 206.16±33.53 VS 118.41±24.16).4、SPK对氧化损伤内皮细胞培养液中NO、NOS含量的影响与正常组相比较,H202氧化损伤使内皮细胞分泌NO量明显降低,(P0.05)；与损伤组相比较,除低剂量组外,Vitamin E和SPK均能使NO分泌量增加,且Vitamin E使NO升高的作用更明显。在NOS含量方面,各组间两两比较的数据差异均无显著性,与正常组相比,损伤组的细胞培养液中NOS含量稍有升高(P0.05)；与损伤组对比,低中高浓度组细胞培养液中NOS含量呈下降趋势(P0.05)。5、SPK对氧化损伤内皮细胞培养液中SOD、GSH-PX活性,细胞内MDA含量的影响与正常组比较,损伤组中SOD、GSH-PH两种氧化还原酶的活性均明显下降,脂质过氧化产物MDA含量明显上升；与损伤组比较,阳性组及SPK各浓度组对SOD及GSH-PX的活性均明显上调,而MDA含量则明显下降；此种改变在SOD/MDA的比值上体现的更加明显。6、SPK对氧化损伤内皮细胞内ATP含量及LDH渗出量的影响与正常组细胞相比,损伤组细胞的ATP含量明显下降(P0.05),而细胞LDH渗出量明显增加；对比损伤组,阳性组和SPK各浓度组的ATP含量均明显上升,细胞LDH渗出量均降低,且此趋势与SPK的浓度呈剂量效应关系。7、SPK对氧化损伤内皮细胞培养上清液中ICAM-1含量的影响与正常组相比,H2O2氧化刺激可使内皮细胞ICAM-1分泌量增多,达正常细胞的2.3倍,阳性对照组和SPK组与H2O2损伤组比较,ICAM-1含量明显下降,且高浓度的SPK效果强于VitE。结论：SPK可以拮抗H2O2诱发的HUVECS的氧化损伤,提高HUVEC细胞活力,对HUVEC具有一定的保护作用。实验证明SPK可提高内皮细胞抗氧化体系中SOD、GSH-PX的活力,增加NO含量,减少H2O2刺激下HUVECS分泌的MDA,降低单层细胞通透性,减少细胞外溢出的LDH和细胞分泌的ICAM-1,最终达到提高内皮细胞抗氧化能力的效果,对抗氧化应激造成的细胞损伤,推测其可能具有预防动脉粥样硬化形成的作用。
【关键词】：人脐静脉内皮细胞(HUVECS) 螺旋藻激酶(SPK) 氧化损伤(Oxidative damage) 动脉粥样硬化(AS)
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R54
【目录】：

• 个人简历3-5
• 主要英汉缩略对照表5-7
• 摘要7-11
• ABSTRACT11-15
• 前言15-17
• 材料与方法17-27
• 实验结果27-42
• 讨论42-50
• 结论50-51
• 参考文献51-55
• 综述55-70
• 参考文献65-70
• 致谢70
• 攻读学位期间发表的文章70-71
• 附件71-73

【参考文献】

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1 高莹;扇贝裙边糖胺聚糖对过氧化氢损伤的血管内皮细胞保护作用的研究[D];青岛大学;2006年

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本文编号：733422