ApoE基因型和5XFAD基因背景对小鼠主动脉粥样硬化及相关炎症分子的影响

发布时间：2017-08-29 04:42

  本文关键词：ApoE基因型和5XFAD基因背景对小鼠主动脉粥样硬化及相关炎症分子的影响

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【摘要】：目的:载脂蛋白E(Apo E)是人血浆中的重要脂蛋白之一,与脂质代谢有密切的关系,其多态性与多种疾病有密切相关,如动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)、阿尔兹海默病(Alzheimer disease,AD)。本研究旨在探讨有/无AD基因背景下,不同Apo E基因型对小鼠血脂、主动脉粥样硬化和炎症分子ICAM-1(Intercelluar Adhesion Molecule-1)、VCAM-1(Vascular Cell Adhesion Molecule-1)、MCP-1(Monocyte Chemoattractant Protein-1)表达的影响,以及MAPKs信号通路在其中的可能调控机制。方法:SPF级雄性、12月龄小鼠,分组:C57BL/6J对照组,Apo E基因敲除(Apo E-/-)组,Apo E2、Apo E3、Apo E4组(分别表达人E2、E3、E4基因的转基因小鼠,Apo E-TR),含有APP/PS1 5XFAD基因背景的Apo E-/-/5XFAD、Apo E2/5XFAD、Apo E3/5XFAD、Apo E4/5XFAD组(Apo E-TR/5XFAD),每小组6-12只。正常饮食喂养12个月后处死动物。收集血清,采用酶法检测血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)。取小鼠主动脉(主动脉根部至主动脉弓)进行冰冻连续切片,应用苏木素-依红染色(HE染色)和苏丹Ⅳ染色后,观察和检测小鼠动脉粥样硬化斑块的组织学特点和病变情况,Image Pro Plus软件测量血管内膜面积;组织免疫荧光法观察主动脉内炎症分子(VCAM-1、MCP-1)表达情况。取小鼠胸腹主动脉(自主动脉根部至髂总动脉分叉处),蛋白印迹法检测主动脉内ICAM-1、VCAM-1蛋白表达量、MAPKs(ERK、JNK、P38)表达及磷酸化水平的变化。结果:1、血脂水平的变化:(1)与对照组相比较,Apo E-/-组和Apo E-/-/5XFAD组血清TC、TG、LDL-C水平均显著升高,分别是对照组的8.3、4.9、26.1倍和19.5、5.2、31.0倍,non-HDL-C水平也明显升高,分别为对照组的33.4倍和54.0倍(P0.05);(2)Apo E2、Apo E2/5XFAD小鼠的TC、TG、LDL-C、non-HDL-C同样较野生型明显升高,是对照组的6.3、4.4、16.3、18.4倍和7.0、2.8、10.1、12.4倍(P0.05);(3)Apo E-TR组和Apo E-TR/5XFAD组中Apo E3、Apo E4两组的血清TC、TG、LDL-C和non-HDL-C水平与对照组比较均无显著性差异(P0.05);(4)与单纯Apo E-/-组比较,Apo E-/-/5XFAD组TC和non-HDL-C水平明显升高,分别为前者的2.3倍和1.6倍(P0.05)。2、动脉粥样硬化病变程度:(1)Apo E-/-组和Apo E-/-/5XFAD组的主动脉根部动脉粥样硬化病变明显,可见斑块形成,内膜面积较对照组有明显增大,分别为58107.6±7339.0μm2(Apo E-/-组)、96208.6±32032.5μm2(Apo E-/-/5XFAD组)VS 18819.3±2162.7μm2(对照组)(P0.05);(2)Apo E2/5XFAD组主动脉可见少量斑块形成,但是分析其内膜面积与对照组比较没有显著差异(40078.7±25272.5μm2 VS 18819.3±2162.7μm2,P0.05);(3)无论有无AD基因背景,Apo E3、Apo E4组小鼠主动脉未见明显动脉粥样硬化病变,其内膜面积与对照组比较无显著差异(P0.05)。3、主动脉炎症分子的表达:(1)主动脉提取物ICAM-1蛋白的表达在Apo E-/-组和Apo E-/-/5XFAD组显著高于对照组(P0.05);无论有否AD基因,Apo E-TR各组(Apo E2、Apo E3、Apo E4)组和Apo E-TR/5XFAD各组(Apo E2/5XFAD、Apo E3/5XFAD、Apo E4/5XFAD)ICAM-1蛋白的表达与对照组比较均无显著差异(P0.05);(2)主动脉提取物中VCAM-1蛋白表达在Apo E-/-组、Apo E-/-/5XFAD组和Apo E2/5XFAD组显著高于对照组(P0.05);Apo E-TR各组(Apo E2、Apo E3、Apo E4)组和Apo E3/5XFAD、Apo E4/5XFAD组VCAM-1蛋白表达与对照组比较均无显著差异(P0.05);(3)在主动脉免疫荧光染色中,VCAM-1和MCP-1荧光强度在Apo E-/-组、Apo E-/-/5XFAD组和Apo E2/5XFAD组增强。4、MAPKs磷酸化水平:(1)与对照组比较,ERK1/2磷酸化水平在Apo E-/-、Apo E2和所有Apo E-TR/5XFAD组中升高(P0.05);(2)JNK磷酸化水平仅在Apo E-/-组中升高(P0.05),在其他Apo E-TR组和所有Apo E-TR/5XFAD组中无显著变化(P0.05);(3)在所有组别中P38磷酸化水平未见显著差异(P0.05)。结论:1、无论有否AD基因背景,Apo E基因缺失小鼠均可导致严重的高脂血症、主动脉AS斑块和ICAM-1、VCAM-1等炎症分子高表达;Apo E2基因型可引起明显高脂血症,但其促主动脉AS和上述炎症分子高表达还受到AD基因背景的影响;含Apo E3、E4小鼠未见明显脂质代谢紊乱、AS病变和ICAM-1、VCAM-1等炎症分子高表达。2、5XFAD基因背景可在一定程度上加剧Apo E-/-小鼠的脂质代谢紊乱,加重Apo E-/-小鼠和Apo E2小鼠AS病变程度,促进炎症分子高表达。3、在Apo E-/-、Apo E2和Apo E-TR/5XFAD小鼠主动脉中ERK1/2信号通路被激活。
【关键词】：载脂蛋白 E 动脉粥样硬化 炎症分子 丝裂原活化蛋白激酶5XFAD 基因
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R543.5
【目录】：

• 缩略词表4-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-14
• 材料和方法14-21
• 结果21-33
• 1. Apo E基因型和 5XFAD基因背景对血脂代谢的影响21-23
• 2. Apo E基因型和 5XFAD基因背景对主动脉粥样硬化的影响23-26
• 3. Apo E基因型和 5XFAD基因背景对主动脉炎症分子表达的影响26-31
• 4. Apo E基因型和 5XFAD基因背景对主动脉MAPKs磷酸化的影响31-33
• 讨论33-39
• 结论39-40
• 参考文献40-43
• 综述43-49
• 参考文献47-49
• 致谢49

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 张清德;曲忠森;;阿尔茨海默病患者血脂及内皮功能的变化[J];中国实用神经疾病杂志;2008年08期

2 崔虎;关立克;;丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在动脉粥样硬化中的意义[J];吉林医学;2013年01期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 于笑峰;载脂蛋白E基因多态性与颈动脉粥样硬化的相关性研究[D];青岛大学;2006年

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本文编号：751394